ГОСТ I* 51426-99
4 Сущность .метода
Сущность метода заключается и приготовлении исходной суспензии с равномерным, насколько
это возможно для испытуемой пробы, распределением микроорганизмов. При необходимости, для
того, чтобы снизить количество микроорганизмов па единицу объема и сделать возможным
после инкубации наблюдение за их ростом или подсчет колоний, готовят десятикратные
разведения.
Приемлемое количество микроорганизмов обычно составляет:
- для наиболее вероятного метода подсчета с использованием трех пробирок: I микроорганизм
в 10 см5самого высокого десятикратного разведения;
- для метода подсчета колоний: от 30 до 300 колоний (для некоторых групп, например,
колиформ от 15 до 150 колоний).
5 Разбавитель
5.1 Чтобы добиться воспроизводимости результатов, для приготовления разбавителя следует
использовать обезвоженные основные компоненты или обезвоженный полноценный препарат.
Следует строго соблюдать инструкции изготовителя.
Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.
Используемая подадолжнабытьдистиллированной встеклянном аппарате илидеионизированной.
5.2 Состав
Если нет неопровержимых доказательств (например, авторитетных данных или сравнительных
опытов), что другие разбавители более приемлемы для данных продуктов, то следует использовать
разбавитель следующего состава: 1,0 г пептона, 8,5 г хлористого натрия, 1дм3 воды.
5.3 Приготовление
Компоненты растворяют в воде, если это необходимо, с подогревом.
pH разбавителя после стерилизации должен быть равен 7,0 при 25 “С.
5.4 Распределение разбавителя
Разбавитель помещают в пробирки, колбы или флаконы соответствующей вместимости втаком
количестве, чтобы после стерилизации каждая из них содержала 9 см3 разбавителя или объем,
кратный 9 см3(для десятикратных разведений), или 90 см3 разбавителя, или объем, кратный 90 см3
(для исходной суспензии). В случае нежидких продуктов см. 9.1.2. Закрывают пробирки, колбы или
флаконы пробками.
Пробирки, колбы или флаконы с разбавителем стерилизуют в автоклаве при (121±1)’С в
течение 20 мин.
Если разбавитель не используют сразу, его следует хранить втемноте при температуре от 0 до 5 *С
не более одного месяца в условиях, не допускающих никаких изменений в его объеме или составе.
П р и м е ч а н и е — При подсчете нескольких групп микроорганизмов, нуждающихся в различных
культуральных средах, необходимо распределить все разведения (или некоторые из них) в количествах,
превышающих 9 см3. Вместимость пробирок, колб или флаконов должна быть соответственно указана.
6 Оборудование
Для проведения испытаний применяют обычное микробиологическое оборудование.
6.1 Прибор для сухой или влажной стерилизации (печь или автоклав, работающий отдельно
или как часть прибора для приготовления и распределения сред).
Прибор, который будет входить в контакт с разбавителем, пробой или разведениями, кроме
оборудования, которое поставляют стерильным (пластиковые чашки, пластиковые пипетки и т.д.),
следует стерилизовать по одному из следующих методов:
- путем выдерживания в печи при 170— 175 *С в течение 1ч;
- путем выдерживания в автоклаве при (121±!) *С в течение 20 мин.
6.2 Оборудование для встряхивания (для нежидких продуктов см. 9.1.2).
Допускается использовать один из следующих приборов:
- вращательный встря.хиватель, устойчивый к условиям стерилизации, работающий частотой
вращения от 8000 до 45000 об/мин со стеклянными или металлическими резервуарами, снабженны
ми крышечками:
- встряхиватель перистальтического типа (стомахер) со стерильными пластиковыми емкостями.
П р и м е ч а н и е —Резервуары или пластиковые емкости должны быть достаточной вместимости, по
зволяющей пробе эффективно перемешиваться с достаточным количеством разбавителя. Как правило, вмес
тимость контейнера должна в два раза превышать объем пробы плюс разбавитель.
2
78