С. 5 ГОСТ 18663-78
натрий лимоннокислый —0.5 г:
магний сернокислый —0,1 г;
аммоний сернокислый —I г;
глюкоза —2 г;
натрий хлористый — 0,5 г;
натрий азотистокислый —0.5 г или калий цианистый —0,02 %-ный раствор —5 см3;
вода дистиллированная —до 1000 см3.
В колбу вместимостью 1000 см’ наливают дистиллированную воду и последовательно раство
ряют в ней все компоненты. Затем доводят содержимое колбы дистиллированной водой до метки.
Конечное значение pH среды устанавливают 6,8—7,0.
(Измененная редакция, Изм. № 1).
3.5.2.4. Приготовление посевной культуры
Посевную культуру готовят за сутки до постановки опыта. Для этого пробирки с 10 см3
основной среды и витамином В|2(из расчета 0,025 мкг в 1см3 среды) или ^/-метионином (из расчета
I мкг в 1см3среды) стерилизуют в автоклаве при 1 кгс/см1 в течение 20 мин и после охлаждения петлей
вносят культуру с агаровой среды.
Пробирки выдерживают в термостате 16—20 ч при температуре 37 “С. Полученную бактери
альную суспензию разводят стерильным 0,9 %-ным раствором хлористого натрия или стерильной
основной средой, разбаатенной вдвое стерильной дистиллированной водой в соотношении одна
капля суспензии на 10 см3 раствора или среды.
3.5.2.5. Приготовление разведений стандартного раствора витамина В12
Перед приготовлением стандартного раствора витамина В12 определяют его содержание в
кристаллическом инанкобаламине или в его растворе на спектрофотометре.
Для этого около 0.1 г кристаллического цнанкобаламина, взвешенного с погрешностью не
более 0,0001 г, растворяют в билистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 500 см3 и
доводят объем раствора до метки.
25 см3полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3и доводят объем
раствора бидистиллированной водой до метки. Оптическую плотность определяют на спектрофото
метре при длине ваты 361 нм в кювете с толщиной слоя 1см.
Массовую долю цнанкобаламина (X) в процентах вычисляют по формуле
У _ D-S00•10
207 т ’
где D —оптическая плотность испытуемого раствора;
207 —удельный показатель поглощения £’[^ч чистого безводного цнанкобаламина при длине
волны 361 нм;
т —масса навески, г.
Раствор цнанкобаламина из ампулы разводят бидистиллированной водой до содержания около
0,02 мг цнанкобаламина в 1 см3, измеряют оптическую плотность полученного раствора на спек
трофотометре при длине волны 361 нм в кювете с толщиной слоя I см. В качестве контрольного
раствора применяют бидистиллированную воду. Содержание цнанкобаламина (^,) в мг в см3
вычисляют по формуле
_ /м и -Г,
1207 V *
где У, —конечный объем раствора, см3;
V —объем раствора цнанкобаламина, взятый для разведения, см3.
Стандартный раствор готовят из расчета 10 мкг витамина В,> на I см3 бидистиллированной
воды.
Раствор хранят в холодильнике в темной стеклянной посуде с притертой пробкой под слоем
толуола в течение месяца. По истечении срока хранения раствор подлежит проверке на спектрофо
тометре по методике для раствора цнанкобаламина.
В день опыта раствор разводят в 2 10; раз (последовательно в 100, 100. а затем в 20 раз). Затем
из этого разведения готовят четыре рабочих разведения и одно контрольное. Каждое из них готовят
в трех повторностях, для чего в 15 пробирок (по три для каждого разведения и контроля) пипеткой
вносят по 5 см3 основной среды и следующие количества раствора витамина В,,: 0,0; 0,5; 1.0;
1,5;
%