ГОСТ 18663-78 С. 4
уголь активированный марки «Бау* по ГОСТ 6217—74;
толуол по ГОСТ 5789-78;
калий фосфорнокислый однозамсшенный по ГОСТ 4198—75;
натрий лимоннокислый трехза.мешенпый по ГОСТ 22280—76;
аммоний сернокислый по ГОСТ 3769—78;
глюкозу по ГОСТ 6038-79;
натрий хлористый по ГОСТ 4233—77;
натрий азотнокислый по ГОСТ 4197—74 или калий цианистыйтехнический по ГОСТ 8465—79;
(II-метионин;
бумагу фильтровальную лабораторную по 1’ОСТ 12026—76;
спектрофотометр СФ-26 или других аналогичных марок.
(Измененная редакция, Изм. № 1).
3.5.2.Подготовка к испытанию
3.5.2.1. Приготовление 10 %-ного казеинового кислотного гидролизата
100 г размолотого казеина, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г, помешают в колбу
вместимостью 1000 см’, добавляют 500 см3 20 %-ной соляной кислоты и перемешивают. К колбе
присоединяют обратный холодильник и нагревают в течение 24 ч. Первые 5—8 ч нагревание про
водят на водяной бане при температуре 100 ’С, а затем на плитке с асбестовой сеткой.
Из полученного гидролизата под вакуумом отгоняют соляную кислоту до получения густого
сиропа. Затем добавляют 300 см’ дистиллированной воды и снова отгоняют до получения густого
сиропа. Указанную операцию повторяют еще раз.
Оставшуюся массу растворяют в 100 см3 дистиллированной воды, доводят pH до 3,5 5 и.
раствором едкого натра, помешают в мерную колбу вместимостью 10(H) см3 и доливают до метки
дистиллированной водой.
Добавляют 20 см’ активированного угля и периодически встряхивают в течение 1 ч, затем
полученную смесь фильтруют на воронке Бюхнера. Фильтрат еще раз обрабатывают углем до
получения бесцветного или слабо-желтого раствора, который разливают в колбы вместимостью до
100 см3и стергглнзуют в автоклаве при 1кгс/см- в течение 20 мин и затем охлаждают. Раствор хранят в
холодильнике под слоем толуола.
3.5.2.2. Выращивание чистой культуры Е. coil штамм 113—3
Культуру вырашивают в пробирках на агаровых косяках и хранят в холодильнике при темпе
ратуре 3—5 *С.
Состав агаровой среды в расчете на 100 см’:
казеиновый кислотный 10 %-ный гидролизат —6 см3;
калий фосфорнокислый дву.замешейный —20 мг;
железо сернокислое —0.5 мг;
магний сернокислый —20 мг;
/-аспарагин —20 мг;
глицерин —200 мг;
агар — 1,5 г;
витамин В,2— 10 мкг;
вода дистиллированная —до 100 см3.
В колбу вместимостью 100 см3наливаютдистиллированную воду и последовательно растворя
ют в ней первые четыре компонента.
/-аспарагин отдельно растворяют в дистиллированной воде с прибавлением нескольких капель
1 н. соляной кислоты, а затем приливают к раствору в каабе. I н.раствором едкого натра доводят
pH раствора до 7,0. Избыток щелочи нейтрализуют 1 н. раствором соляной кислоты.
К раствору добавляют глицерин, агар и доливают дистиллированной водой до метки. Затем
каабу с содержимым подогревают на водяной бане до растворения агара, вносят витамин В,, и смесь
тщательно перемешивают. Смесь разливают по 5 см’ в пробирки и стерилизуют 15 мин под даре
нием 1 кгс/см3.
Культуру раз в месяц пересевают на свежую агаровую среду и выдерживают в термостате в
течение 24 ч при температуре 37 *С.
3.5.2.3. Приготовление основной среды
Состав среды в расчете на НХК) см3:
калий фосфорнокислый двузамешенный - 7 г;
калий фосфорнокислый однозамещенный —3 г;
95