С. 5 ГОСТ 25102-90
1012
Натрий тетраборнокислый Ю-водный по ГОСТ 4199. ч. д. а.
Натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201. ч.д. а.
Пептон бактериологический по ГОСТ 13805.
Среда сухая лактатно-аиетатная для селективного учета анаэробов (ЛАССА-Углич) по ТУ
49 1039.
3.2. П о д г о т о в к ак а н а л и з у
3.2.1. Подготовка аппаратуры и материалов - по ГОСТ 9225.
3.2.2. Приготовлениесред
3.2.2.1. Раствор хлористого натрия, дрожжевой автолизат и водный агар готовят по пп. 2.2.2.1,
2.2.2.2, 2.2.2.5.
3.2.2.2. П р и г о т о в л е н и ем я с о п е п т о н н о г об у л ь о н а
Говяжье мясо, освобожденное от жира и сухожилий, пропускаютчерез мясорубку, взвешивают,
складывают в кастрюлю: заливают двойным количеством питьевой воды, отмечают первоначальный
объем и оставляют на 18—24ч при температуре (5±1) *С. После этого для ускорения процесса экстрак
ции питательных вешестп из мяса содержимое кастрюли подогревают до температуры (50±5) *С и
выдерживают в течение 60 мин и затем кипятят 30-40 мин. После кипячения бульон в горячем
состоянии фильтруют через двойной бумажный фильтр. Фильтратдоводят питьевой водойдо первона
чального объема, добавляют к нему (1,010.1) % массовой доли бактериологического пептона и
(0.5±0.1) % массовой доли хлористого натрия и устанавливаютс помощью раствора с массовой далей
гидроокиси натрия 20% pH (7,310.1). Подготовленный бульон стерилизуют при температуре
(12112) *С в течение (2015) мин.
3.2.2.3. П р и г о т о в л е н и еп и т а т е л ь н о йс р е д ыд л яо п р е д е л е н и я
к о л и ч е с т в ас п о р м е з о ф и л ь н ых л а к т а т с б р а ж и в а ю щ и ха н а э р о 6-
н ы х б а к т е р и и
К 1дм’питьевой воды добавляют (50,010,5) г сухойлактатноацетатной среды для селективного
учета анаэробов. Смесь перемешивают, нагревают до полного растворения агара и кипятят (411) мин.
не допуская пригорания. Полученную среду в горячем состоянии фильтруют через ватно-марлевый
фильтр, разливают в пробирки по () см5, закрывают ватными пробками и стерилизуют при
температуре (12112) *Свтечение (2015) мин.
Допускается приготовление питательной среды ЛАССА-Углич из отдельных ингредиентов. Для
этого к 900см5мясопептон ного бульона, приготовленного по п. 3.2.2.2, добавляют 5 г молочнокислого
кальция, 5 г уксуснокислого натрия, 0,8 г солянокислого цистеина или 1.0 г аскорбиновой кислоты,
40см5дрожжевого автолизата, приготовленного по п. 2.2.2.2. или 4 гсухого дрожжевого автолизата и
20 гагара. Смесь нагревают до температуры (9512) "С. выдерживают при постоянном помешивании до
расплавления агара и добавляют по 10см’ водных растворов с массовой долей треххлористогожелеза и
тетраборнокислого натрия 0,01 %, 10 см’ водного раствора с массовой долей кислого углекислого
натрия 1 % и 1см* водного раствора с массовой долей индикатора нейтрального красного 0.4 %. С
помошыо водного раствор с массовой далей молочной кислоты 20 % доводят pH (5.70±0,05). Приго
товленную среду разливают в пробирки по (1012) см5, закрывают ватными пробками и стерилизу ют
при температуре (11512) *С в течение (2015) мин. Затем ватные пробки в стерильных условиях
заменяют на стерильные резиновые.
Готовая среда должна иметь интенсивно розовый шли красный цвет.
Допускается замена мясопеитонного бульона гидролизатом казеина и пептоном. Для этого к 1дм5
гидролизата казеина добавляют 10 г пептона, устанавливают pH (7.010.1), нагревают до кипения,
фильтруют через бумажный фильтр в чистые колбы и стерилизуют при температуре (12112) *С в
течение (2015) мин.
3.3.П р о в е д е н и еа н а л и з а
3.3.1. Подготовку образцов проводят по п. 2.2.3.
3.3.2. Посев образцов проводят по п. 2.2.3, используя лактатноаиетатную питательную среду для
селективного учета анаэробов.
Культивирование посевов проводят в термостате при температуре (3711) *С в течение 72 ч.
3.4. О б р а б о т к ар е з у л ь т а т о в
3.4.1. Рост мезофилъныхлактатсбраживаюших анаэробных спорообразующих бактерий в посевах
определяют пообразованию разрывовстолбика агара и изменению цвета питательной среды с красно
годо соломенно-желтого.
3.4.2. Определение наиболее вероятного числа спор мезофилъных лактатсбраживаюших анаэроб
ных бактерий проводят по п. 2.4.2.