С. 6 ГОСТ 23581—91
вой и второй лунках должна быть полная агглютинация, в треть
ей—частичная агглютинация, в четвертой — четко выраженный
диск («пуговица») осевших эритроцитов.
Если в третьей лунке оказывается полная агглютинация, то это
означает, что выбранная доза вируса содержит не 4 АЕ, а боль
ше. В этом случае доза должна быть уменьшена. И наоборот,
отсутствие агглютинации во второй и частично в третьей лунках
свидетельствует о недостаточности вируса. Увеличивают или умень
шают рабочую дозу, добавляя соответственно вирус или физиоло
гический раствор и затем повторно проверяют правильность выбо
ра 4 АЕ.
2.3.3. Для постановки основного опыта в ряд лупок, начиная со
второй, наливают по 0,2 см3 физиологического раствора. Затем
в первую и вторую лунки добавляют по 0,2 см3 специфической сы
воротки. Во второй лунке смесь пикетируют и переносят 0.2 см3
в третью лунку и т. д. до требуемого разведения. После этого во все
лунки вносят по 0,2 см3 рабочего разведения вируса (4 АЕ).
Панели встряхивают и после 30-минутного контакта сыворотки с
вирусом в каждую лунку добавляют по 0,4 см’ 1 %-ной суспензии
эритроцитов.
Для точности учета РТГА ставят контроль:
сыворотки (0,2 см’ сыворотки + 0.2 см3 физиологического ра
створа и 0,4 см’ I %-ной суспензии эритроцитов);
эритроцитов на спонтанную агглютинацию (0,2 см’ физиологи
ческого раствора ±0,2 см3 1 %-ной суспензии эритроцитов).
2.3.4. Обработка результатов
РТГА считают положительной, а идентификацию вируса завер
шенной. если специфическая сыворотка тормозит гемагглютиниру-
ющую активность вируса не менее 1/4—1/8 титра, указанного на
этикетке ампулы (флакона).
2.4. Метод выявления специфических антител
Сущность метода заключается в обнаружении специфической
способности антител сыворотки крови больных и переболевших
птиц подавлять гемагглютинирующую активность вируса в РТГА.
С этой целью исследуют в РТГА с диагностическими антигенами
вируса гриппа не менее 20 проб сыворотки крови от каждой об
следуемой партии птиц.
2.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы — по пп. 2.1.1, 2.3.1 и до
полнительно:
глицерин,
лед сухой.
2.4.2. Подготовка к исследованию
Исследуемые сыворотки предварительно разводят в соотноше
нии 1: 5 дистиллированной водой. Для удаления термолабильных
ингибиторов сыворотки прогревают в водяной бане при 60 °С в