С.
4
ГОСТ 2S6R1—®1
Перед вскрытием эмбрионов скорлупу обрабатывают йодом и
фламбируют и из каждого эмбриона отдельно собирают экстра-
эмбрнональную жидкость в стерильные пробирки, которую высе
вают на МГ1Б и МПА и проверяют на гемагглютинирующую ак
тивность вируса в капельной реакции гемагглютинацин (РГА).
Реакцию ставят на стекле путем смешивания равных капель экст
раэмбриональной жидкости с ! %-ной взвесью эритроцитов кур.
При отрицательной РГА образцы экстраэмбрионалыюй жидкости
в количестве 1—2 см3от каждого зараженного эмбриона (не менее
5 эмбрионов) объединяют и вновь заражают не менее 10 эмбри
онов.
Выделение вируса проводят в течение 3-х пассажей на куриных
эмбрионах, проверяя в каждом пассаже экстраэмбриональную
жидкость на наличие гемагглютинннов в капельной РГА. Если тит
ры гемагглютинннов низкие, проводят еще 2—3 дополнительных
пассажа.
2.1.4. Обработка результатов
Результат исследования пробы патологического материала счи
тают отрицательным, если в трех дополнительных пассажах не бу
дет обнаружено гемагглютинацин эритроцитов.
При наличии гемагглютинацин эритроцитов проводят иденти
фикацию выделенного вируса.
2.2. Метод постановки реакции гемагглютинацин
Сущность метода заключается в способности вируса гриппа
птнц агглютинировать эритроциты кур.
2.2.1. Аппаратура, материалы и реактивы
2.2.1.1. А п п а р а т у р а ,м а т е р и а л ыиреактивы —
по п. 2.1.1 н д о п о л н и т е л ь н о :
мнкротнтратор типа Такачн или аналогичный;
мнкропипетки;
панели из плексигласа.
2.2.2. Проведение исследования
Готовят двукратные разведения вирусосодсржащсго материала
(надосадочную жидкость, полученную после обработки патологи
ческого материала как указано в п. 2.1.2.1.) от 1:2 до 1: 1024.
Для
этого в ряд лунок панелей из плексигласа наливают физиологиче
ский раствор в объеме 0,2 см3. В первую лунку вносят 0.2 см3
вируса, трехкратно пипетнруют и переносят 0.2 см3 во вторую лун
ку и т. д. до требуемого разведения. Из последней лунки 0.2 см3
удаляют в дезинфицирующий раствор. В каждую лунку добавля
ют по 0,2 см3 1 %-ной суспензии куриных эритроцитов. Панели
встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин.
Контролем служат две лунки с эритроцитами и физиологиче
ским раствором в равных объемах по 0.2 см3 каждого. Реакцию
гемагглютинацин и реакцию торможения гемагглютинацин (РТГА)
ставят также с использованием микротитраторов или микропипе-