ГОСТ 25581-91
С.
3
Парафин.
Развивающиеся эмбрионы кур 9—10-суточного возраста.
Эритроциты кур на физиологическом растворе. 0.7 и I %-ная
взвесь, которую готовят следующим образом: кровь берут у пе
тухов или кур в возрасте старше б мес из подкрыльцовой вены
в колбу с физиологическим раствором в равных объемах с ра
створом лимонно-кислого натрия.
Полученную кровь трижды отмывают физиологическим раство
ром. осаждая эритроциты центрифугированием с частотой враще
ния 1500_! в течение 10 мин Из осадка эритроцитов готовят 0,7 или
1%-ную суспензию на физиологическом растворе и хранят не
более 5 сут при температуре 4 °С.
2.1.2. Подготовка к исследованию.
2.1.2.1.О б р а б о т к ао р г а н о вп а т ол ог иче с к ог о
м а т е р и а л а
Патологический материал стерильно извлекают из глицериново
го раствора, трехкратно ополаскивают стерильным физиологичес
ким раствором и гомогенизируют с помощью размельчителя тка
ней или размельчают в ступке с кварцевым стеклом. Гомогенат
разводят I : 10 стерильным физиологическим раствором и центри
фугируют с частотой вращения 1500—2000-’ в течение 15 мин.
Надосадочную жидкость переносят в стерильные пробирки, добав
ляют 1000 ед/см3 стрептомицина и выдерживают при комнатной
температуре 60 мин.
2.1.3. Проведение исследования
Д
ля
исследования одной пробыматериала(надосадочная
10%-.нля суспензия) заражают не менее 10 эмбрионов. Перед за
ражением "эмбрионы предварительно овосколируют, отмечая гра
ницу пуги и участок между кровеносными сосудами для прокола
скорлупы и инокуляции исследуемого материала. Скорлупу со сто
роны пуги и место прокола дезинфицируют раствором йода и
фламбнруют. В центре воздушного пространства и в месте введе
ния исследуемого материала делают пробойником отверстия, за
тем через боковое отверстие вводят 0,2 см3 исследуемого матери
ала на глубину 2—3 мм в аллантоисную полость. Одновременно
делают его высевы по 0,2 см3 на питательные среды МПБ и МПА,
которые помещают в термостат при 37—38°С. Контролем служат
5 незараженных эмбрионов. После заражения эмбрионов отвер
стия в скорлупе заливают парафином. Зараженные и контрольные
эмбрионы инкубируют в термостате в течение 24—96 ч при тем
пературе 37—38 °С и относительной влажности 60—70%. В про
цессе инкубации эмбрионы овоскопнруют два раза в сутки,
по гибшие—сохраняют в холодильнике при 4°С. Через 96 ч
инкуба ции все эмбрионы вскрывают после предварительного
охлаждения в холодильнике при 4°С в течение 10—12 ч.