С. 3 ГОСТ 29177-91
комнатной температуры раствор доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Плотность полученного раствора должна составлять 1.14 г/см5.
2.2.7. Приготовление ацетатного буфера с pH = 4.7—5,0
Для приготовления ацетатного буфера берут раствор ледяной уксусной кислоты массовой
концентрации 1 моль/дм5 (60.12 г уксусной кислоты на 1 дм5 воды) и уксуснокислого натрия
(136.09 г уксуснокислого натрия на 1дм5).
Ацетатную буферную смесь готовят смешиванием указанных растворов в соотношении от 1:1
до 1:2 соответственно значениям pH 4,7—5,0.
2.2.8. Приготоатение раствора ферментного препарата глюкоамилазы
Навеску ферментного препарата очищенной глюкоамилазы массой 1 г при глюкоамилазной
активности препарата (ГлА) 1000 Ед на 1 г или 0.5 г при активности препарата 2000 ГлА на I г
помещают в стеклянный стаканчик вместимостью 25 — 30 см3. Туда же добавляют небольшое
количество дистиллированной воды и тщательно растирают стеклянной палочкой до получения
однородной массы. Полученную массу количественно переносят в мерную колбу вместимостью
100 см5, доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают и, при необходимости, фильт
руют через стеклянную воронку с бумажным фильтром. 1см’раствора ферментного препарата имеет
глюкоамилазную активность 10 Ед. При необходимости активность препарата глюкоамилазы про
веряют по ГОСТ 20264.4.
Раствор ферментного препарата хранят не более суток при температуре от плюс 2 до минус
4 ”С.
2.3. Проведение испытания
Навеску испытуемой пробы массой 1 г помещают в коническую колбу вместимостью 100 см5.
Затем приливают 25 см5 дистиллированной воды температурой 37 "С, 3 см5 ацетатного буфера и 2
см’ раствора ферментного препарата. Колбы выдерживают в биологическом термостате 1 ч при 37
‘С, периодически, примерно через 15 мин, перемешивая их содержимое. После этого отбирают 10
см5 недосадочной жидкости и переносят в коническую колбу, куда предварительно наливают 10 см5
раствора Фединга 1 и 10 см5раствора Фединга 2. Полученную смесь нагревают до кипения на
электроплитке или газовой горелке и кипятят 3 мин, при этом выпадает осадок закиси меди
красно-бурого цвета. После охлаждения до комнатной температуры в колбу с осадком вносят 20 см5
раствора серной кислоты, приготовленной по п. 2.2.6, и 2 г йодистого калия.
Выделившийся свободный йод быстро оттитровывают раствором гипосульфита натрия, приго
товленного по п. 2.2.5, до кофейной окраски, после чего вносят I см’ раствора растворимого
крахмала и снова титруют до молочно-белой окраски.
Параллельно опыту ставят контрольный опыт, в котором вместо недосадочной жидкости берут
10 см3дистиллированной воды, остальные операции проводят в той же последовательности, что и
для опытной пробы.
2.4. Обработка результатов
Количество глюкозы (Л) в миллиграммах в 1 г сухого вещества анализируемой пробы вычис
ляют по формуле
( * ,- * „ ) -
30
-
3.3
К
Х ~10(1- W)
где NK—объем гипосульфита натрия, израсходованный на титрование контрольной пробы, см5;
iVu —объем гипосульфита натрия, израсходованный на титрование опытной пробы, см5;
30 —объем исходной суспензии в колбе, см3;
3,3 —коэффициент пересчета 0,1 моль/дм5раствора гипосульфита натрия на глюкозу, установ
ленный экспериментальным путем;
К —поправочный коэффициент к титру гипосульфита натрия;
10 —количество гидролизата, израсходованное на анализ;
W - массовая доля влаги в анализируемой пробе, г.
Вычисления проводят до первого десятичного знака с последующим округлением до целого
числа.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результа
тов двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны пре
вышать 10 % от среднеарифметического результата.