ГОСТ 25385-91 С. IS
а).
ном по п. 2. .2.3.
С.
Титр каждой серииантигенаи гемолизина устанавливают
предприятия-изготовители.
2.2.3.4. Реакцию длительного связывания комплемента на хо
лоде (РДСК) проводят в пробирках или полистироловых плас
тинках с лунками в объеме 1 см1 (по 0.2 см3 кзждого компонента:
сыворотки, антигена, комплемента, гемолизина, эритроцитов ба
ран
Все компоненты реакции разводят в разбавителе, приготов
лен
Испытуемые
2
сыворотки исследуют в разведениях 1:5 и выше
с антигеном и 1:5 без антигена (контроль).
Инактивациюразведенных сыворотоквсех видов животных
проводят при температуре 63—64ЭС в течение 30 мин. Антиген бе
рут в рабочем (удвоенном) титре, комплемент в разведении 1:25
(при титре в гемсистсме, указанном бнопредпрнятием 0.19—0,22),
гемолитическую сыворотку в учетверенном титре, эритроциты ба
рана — 3—4% от осадка’(пп. 2.2.2.5 и 2.2.2.6). Время связывания
комплемента -- 15—18 ч при температуре 4—8°С н 20 мин при
комнатной температуре, время реакции после добавления гемоли
тической системы — 20 мин в водяной бане при температуре 37—
38°
Контроль реакции: негативная, позитивнаябруцеллезная и
овненая сыворотки в разведениях 1:5 и выше с антигеном и 1:5
без антигена, антиген в двойной дозе без сыворотки.
Перед разливом гемолитической системы в пробирки (пласти
ны с лунками)проводят титрование гемолитической системы в
присутствии негативной сыворотки, антигена и комплемента. Тит
ром гемолитической системы считают наибольшее ее количество,
которое в присутствии сыворотки и антигена полностью лизирует
ся комплементом, взятым в реакцию. Это количество принимают
за единицу (дозу) гемолитической системы. Для постановки ос
новного опыта берут 0,8 дозы гемолитической системы.
2.2.4. Оценка результатов
2.2.4.1.Роз-бенгал пробу считают положительной при наличии
выраженной агглютинации антигена в виде мелких или крупных
хлопьев розового цвета, наступающей в течение 4 мин. Реакцию
агглютинации, появляющуюся позже 4 мин, не учитывают.
Все сыпоротки, с которыми получена положительная РБП, в
в тот же или на другой день исследуют в РА и РСК (РДСК) для
установления титра агглютининов и наличия комплемент связыва
ющих антител.
Животных с положительной РА или РСК (РДСК) считают
больными бруцеллезом. Животных, с сыворотками которых полу
чена положительная РБП при отрицательных показаниях РА или
РСК (РДСК), подвергают повторному исследованию через 15—
30 сут.