С. 12 ГОСТ 25385-91
шадей — 1:25, I ; 50, 1:100 и 1:200; овей, коз и северных оле
ней -1:12,5, 1:25, 1:50 и 1:100.
Сыворотки разводят карболизировзнным физиологическим раст
вором при исследовании крупного рогатого скота и лошадей; кар-
болнзированным 5%-ным раствором хлористого натрия при иссле
довании сывороток крови овей и коз. Затем в каждую пробирку
или лунку добавляют по 0,5 см3 рабочего раствора антигена (1:10
о соответствующем разбавителе), при этом конечное разведе
ние испытуемых сывороток удваивается.
Одновременно с постановкой реакции проводят контроль: с не
гативной сывороткой в тех же разведениях, как и испытуемые, и
с позитивной сывороткой до ее титра.
После добавления к испытуемым и контрольным сывороткам
антигена пробирки тщательно встряхивают и ставят в термостат
при 37—38аС на 16—20 ч, а затем выдерживают 1 ч при комнат
ной температуре.
2.2.3.3.Реакцию связываниякомплемента (РСК) проводят в
пробирках в объеме 1 см3 (по 0.2 см3 каждого компонента: сыво
ротки, антигена, комплемента, гемолизина, эритроцитов барана)
или полистироловых пластинках с лунками. Все компоненты реак
ции разводятв разбавителе,приготовленном в соответствии с
п. 2.2.2.3.
Испытуемые сыворотки исследуют в разведениях 1:5 и выше
с антигеном и 1:5 без антигена (контроль). Инактивацию разве
денных сывороток крупного рогатого скота, овец, коз, лошадей и
других животных проводят при 58—60Хв течение 30 мин; сви
ней—при 60°С в течение 50 мил; ослов и мулов— при 64—65°С
и буйволов — при 62—65°С в течение 30 мин. Антигены берут в
рабочем (удвоенном) титре, эритроциты барана — 2,5% от осадка.
Реакцию связывания комплемента проводят в водяной бане
при 37—38Х. Время связывания комплемента - 20 мин. время
реакции после добавления гемолитической системы — 20 мин. Для
контроля реакции служат: негативная и позитивная бруцеллезные
сыворотки в разведении 1:5 и выше с антигеном и 1:5 без анти
гена. антиген п двойной дозе без сыворотки.
Для контроля гемолитической системы (приготовленной в со
ответствии с п 2 2.2.3) служат 0.6 см3 разбавителя н 0,4 см3 ге
молитической системы.
Для постановки основного опыта проводят титрование компле
мента (сыворотка крови морской свинки). Титром комплемента
считают его наибольшее разведение, давшее полный гемолиз
0,4 см3 гемолитической системы в присутствии негативной сыво
ротки и антигена в течение 20 мин в водяной бане при температу ре
37—38’С. Это разведение принимают за единицу (дозу компле
мента). Для постановки основного опыта берут 1,2 дозы компле
мента.