ГОСТ 25385—01 С. II
2.2.2.6.Для РСК применяют гемолитическую сыворотку в уд
военном, а для РДСК — учетверенном титре, указанном предпри
ятием, ее изготовившем. Для изготовления гемолитической систе
мы смешивают равные объемы рабочих растворов гемолизина и
эритроцитов и тщательно перемешивают, после чего оставляют на
15—30 мин для сенсибилизации.
2.2.21. Сыворотку получают методом отстоя. Для свертывания
крови и отстаивания сыворотки пробирки с кровью выдерживают
от 30 до 60 мин при температуре от 20 до 30°С, а затем при тем
пературе от 4 до КРС. Через 20—24 ч сыворотку исследуют в те
чение 6 сут со дня взятия крови или консервируют 5-%-ным раст
вором карболовой кислоты (1—2 капли на 1 см* сыворотки) или
сухой борной кислоты (2% кислоты к объему сыворотки). Сыво
ротка крови должна быть прозрачной без признаков гемолиза.
Сыворотки, консервированные карболовой хислотой, пригодны лля
исследования в течение 15 сут, а борной кислотой — 30 сут содня
их консервирования.
2.2.3. Проведение исследования
2.2.3.1. РБПпроводят при температуре18—30*С на чистом
стекле или сухой эмалированной диагностической пластине с лун
ками при помощи комплекта инструментов и приспособлений для
проведения серологических исследований на бруцеллез крови жи
вотных Цельную (неразведенную) исследуемую сыаоротку крови
в дозе 0,03 см3 микропипеткой или шприцем-полуавтоматом вносят
на край дна лунки. При исследовании крови крупного рогатого
скота, верблюдов и лошадей в каждую лунку рядом с сывороткой
вносят 0.03 см3 антигена, а при исследовании сыворотки крови
овец, коз. свиней н северных оленей — 0,015 см3 антигена при по
мощи калиброванной пипеткн-капельиниы (две
и л и
одну каплю).
Затем антиген смешивают с сывороткой полиэтиленовой иля стек
лянной палочкой или ручным смесителем на 25 лунок, распреде
ляя ее при этом по всей поверхности лунки, и покачивают пластин ку
осторожным вращательным движением вручную или на аппа рате
для покачивания диагностических пластин в течение 4 мин.
При проведении реакции контролем служит постановка роз-
бенгал пробы с негативной н позитивной агглютинирующей сыво
ротками в тех же дозах, а также контроль антигена на спонтан
ную агглютинацию (к 0.03 см1 антиген добавляют 0,03 см3 физио
логического раствора).
Все компоненты реакции (исследуемая сыворотка и антиген)
должны иметь температуру нс ниже 18°С.
2.2.3.2. Реакцию агглютинации (РА) проводят в пробирках в
объеме 1 см3 или полистироловых пластинах с лунками. В начале в
объеме 0.5 см3 готовят разведение испытуемой сыворотки, напри
мер, для исследования крупного рогатого скота, верблюдов и ло-