ГОСТ Р ИСО 14851—2022
Приложение D
(справочное)
Вариант двухфазного респирометрического испытания в закрытом сосуде
D.1 Принцип
Эту версию допускается использовать как альтернативную, например, при отсутствии респирометра. Иноку-
лированную среду, а также испытуемые и эталонные материалы встряхивают или перемешивают при температуре от
20 °С до 25 °С в закрытых сосудах, содержащих известные объемы водной среды и воздуха, для обеспечения
устойчивого распределения кислорода между водной и газовой фазами. Во время биоразложения регулярно из
меряют концентрацию растворенного кислорода в водной фазе. Общее поглощение кислорода в испытательных
сосудах вычисляют делением разности измеренных концентраций растворенного кислорода в контрольных пробах и
испытательных сосудах на значение насыщения кислородом при нормальных условиях, умноженное на общее
содержание кислорода, первоначально присутствующее в водной и газовой фазах. Биоразлагаемость вычисляют как
отношение общего потребления кислорода к теоретическому потреблению кислорода (ThOD) и выражают в
процентах.
D.2 Специальная аппаратура
D.2.1 Инкубационные сосуды: газонепроницаемые сосуды, например узкогорлые колбы вместимостью от
200 до 300 см3 с соответствующими пробками (например, притертыми пробками, пробками из бутилкаучука или
завинчивающимися крышками), обеспечивающие защиту от света (например, из коричневого стекла). Рекоменду
ется использовать фиксирующие зажимы. Помечают каждую колбу водостойкой маркировкой. Если не используют
кислородные электроды с установленными мешалками, снабжают колбы стержнем для магнитной мешалки с по
крытием из PTFE. Подходят колбы стандартной вместимости, чтобы стандартное отклонение среднего значения
вместимости для партии колб было не более 1 см3; или измеряют и записывают вместимость каждой пронумеро
ванной колбы с точностью до 1 см3. Тщательно смазывают пробки бутылок инертной силиконовой смазкой для
обеспечения надежного закрытия и легкого удаления.
D.2.2 Кислородный электрод, предпочтительно с установленной мешалкой, обеспечивающий проведение
измерений в диапазоне от 0 до 10 мг/дм3 с точностью до 1 %. Устойчивый режим работы должен достигаться при
мерно в течение 1,5 мин. Устанавливают электрод, например, в пробку из инертного материала, обеспечивающего
герметичную посадку в горловине стеклянного шлифа инкубационной колбы, или используют метод измерения
концентрации кислорода в круговом байпасе.
D.2.3 Магнитная мешалка или встряхивающее устройство.
D.3 Проведение испытаний
Устанавливают инкубационные сосуды FT, FB и Fc как приведено в 8.4. Помещают в каждый сосуд стер
жень для мешалки, если их необходимо перемешивать, а не встряхивать. Готовят достаточное количество ис
пытательной среды, предпочтительно стандартной (6.2.1), для проведения полного испытания. Для обеспечения
достаточного количества питательных веществ увеличивают количество хлорида аммония в растворе А (6.2.1.1) в
три раза — до 1,5 г/дм3. Инокулируют среду в соответствии с 8.3, предпочтительно используя активный ил с кон
центрацией взвешенных веществ 30 мг/дм3, тщательно перемешивают и добавляют смесь в сосуды. Добавляют
объем, равный двум третям вместимости сосуда (например, 200 см3 жидкости в сосуды вместимостью 300 см3).
Помещают сосуды на устройство для встряхивания или перемешивают и инкубируют при температуре от 20 °С до 25
°С в течение одной недели. В это время бактерии используют свой материальный резерв, и инокулят стабили
зируется. Затем аэрируют сосуды с помощью насыщенного водой сжатого воздуха и воздушного диффузора в
течение примерно 15 мин. Измеряют исходную концентрацию кислорода. Добавляют в соответствующие сосу
ды испытуемый или эталонный материал, как приведено в 8.1 и 8.2. Максимальная концентрация испытуемого
материала в этом испытании должна соответствовать 150 мг/дм3 ThOD, что соответствует приблизительно
90 мг/дм3 ТОО. Тщательно закрывают пробками все сосуды и продолжают инкубацию.
После инкубации в течение одной недели или чаще определяют концентрацию растворенного кислорода в
каждом сосуде. При проведении измерений в сосудах поддерживают постоянную температуру инкубации с точ
ностью ± 0,5 °С. Калибруют кислородный электрод в соответствии с инструкциями изготовителя. Для измерения
содержания кислорода энергично встряхивают вручную каждый сосуд по очереди в течение примерно 30 с. Поме
щают сосуд на мешалку (без перемешивания). Удаляют пробку и сразу помещают кислородный электрод в сосуд
таким образом, чтобы пробка электрода плотно закрывала сосуд, а кончик электрода находился значительно ниже
поверхности жидкости. Включают мешалку со скоростью, чтобы было возможно измерение кислорода, но не обра
зовывалось завихрений. Используют одну и ту же скорость мешалки для всех измерений и калибровок электродов.
Записывают значение кислорода, когда оно стабилизируется, что должно быть достигнуто примерно через 2 мин.
Для вычисления результатов испытаний используют только те сосуды, в которых концентрация кислорода была не
менее 1,5 мг/дм3. В качестве альтернативы допускается использовать другие подходящие методы измерения кон-
15