ГОСТ ISO 10718—2016
8 Экстрагирование
8.1 Готовят физиологический раствор или раствор Рингера (4.1). При перемешиваниидобавляют
поверхностно-активное вещество (4.6)до получения концентрации 10 r/л, а затемдобавляюттриптоно-
выйгель(4.7)до получения концентрации 1г/л. После этогос помощью винной кислоты (4.4) доводят pH
до 3—3,5. Наливают в каждую колбу (5.6) примерно по 90 мл раствора иподвергаютстерилизации.
8.2 После охлаждения в каждую колбу в асептических условиях добавляют по 10 мл этилового
спирта (4.5).
8.3 Помещаютв каждуюколбупочетыре корковыепробкитак. чтобы онибыли полностьюпогруже
ны в раствор. Встряхивают колбы в течение 1ч со скоростью от 140 до 160 об/мин при температуре от
20 °С до 25 °С. Число колб зависит от выбранной схемы отбора проб. Половину колб используют
для посева на рекомендуемую среду WLD, другую половину — для посева на рекомендуемую
среду M-Green. Для каждой питательной среды готовятдополнительную колбудля контрольногоопыта.
9 Проведение испытаний
9.1 Общие рекомендации
Испытанияпроводятв соответствиис9.2с использованием стерильнойфильтрационнойсистемы
и стерильных питательных сред, готовых к применению, а затем в соответствии с 9.3, используя
фильтрационную систему, которую предстоитстерилизовать, и сухие питательные среды.
9.2 Экспресс-определение с использованием фильтрационной системы и готовых к
применению стерильных питательных сред
9.2.1 Подготовка
Готовят фильтрационную систему (5.1.1).
9.2.2 Посев на рекомендуемую среду WLD
Подсоединяют наполненную воронку со стерильной мембраной к фильтрационной головке
вакуумного насоса. В асептических условиях фильтруют экстракционный раствор, приготовленный в
соответствии с разделом8. Вконцефильтрацииотключаютвакуумотлинииотсасывания, чтобыустано
вить равновесие с атмосферным давлением. Непосредственно перед посевом в рекомендуемую среду
WLD (4.2) добавляют дифенил (4.8). растворенный в 10 %-ном растворе этанола, чтобы достичь кон
центрациидифенила 30ppm (млн
_
1).Добавляют рекомендуемую средуWLD. содержащуюсяв ампулах,
ненадолго подключаютквакуумудляотсасывания. затемотключают вакуум. Удаляютфильтрационную
установку и вставляют пробку фильтрационной системы в ее основание, чтобы не допустить реинфи
цирования. Убирают цилиндрическую частьворонки. Крышку воронки помещают в системуфильтр/чаш-
ка Петри. Повторяютэту процедурус каждой колбой.
9.2.3 Посев на рекомендуемую среду M-Green
Подсоединяют наполненную воронку со стерильной мембраной к фильтрационной головке
вакуумного насоса. В асептических условиях фильтруют экстракционный раствор, приготовленный в
соответствии с разделом8. Вконцефильтрацииотключают вакуумотлинииотсасывания, чтобыустано
вить равновесие с атмосфернымдавлением. Добавляют питательную среду M-Green (4.3). содержащу
юся в ампуле, ненадолго подключают к вакууму для отсасывания и затем отключают вакуум. Удаляют
фильтрационную установку и вставляют пробку фильтрационной системы в ее основание, чтобы не
допустить реинфицирования. Убирают цилиндрическую часть воронки. Крышку воронки помещают в
систему фильтр/чашка Петри. Повторяют эту процедуру с каждой колбой. Сухую питательную среду
растворяют с использованием стерилизованной деминерализованной воды.
9.3 Определение с помощью стерилизованной фильтрационной системы и сухих
питательных сред
9.3.1 Подготовка рекомендуемых сред
Готовят и стерилизуют рекомендуемые среды WLD (4.2) и M-Green (4.3), следуя инструкциям
производителя. Добавляют дифенил (4.8). растворенный в 10 %-ном растворе этанола, к среде WLD,
чтобы достичь концентрациидифенила 30 ppm(млн ’).
Готовят чашки Петри.
9.3.2 Подготовка фильтрационной системы
Стерилизуют и готовятфильтрационную систему (5.1.2).
3