ГОСТ Р 57166—2016
долго находится в экспоненциальной фазе роста. Стационарная фаза достигается при культивировании свыше
двух месяцев.
П р и м е ч а н и е — Допускается проводить культивирование инфузорий в термобоксе, изготовленном из
оргстекла, с помощью нагревательного элемента, термодатчика и терморегулятора, избегая попадания прямых со
лнечных лучей, или в термостате, но в этом случае необходимо установить маломощную лампудневного света с ре ле
времени, регулирующим освещение: 12 ч свет и 12 ч темнота.
В.2 Подготовка к тестированию Paramecium caudatum Ehrenberg
В.2.1 Оборудование и процедура получения суточной культуры
Для тестирования используют суточную культуру инфузорий Paramecium caudatum Ehrenberg (синхронизи
рованная культура), которую получают в лаборатории следующим способом:
- в чашку Петри вместимостью 50 см3с минеральной средой
Л
озина-
Л
озинского (объем 30 см3) из емкости с
маточной культурой помещают 100 шт. взрослых особей Paramecium caudatum Ehrenberg. кормят и выдерживают в
течение 1 сут;
- через сутки молодь отбирают пастеровской пипеткой с укороченным концом и помещают в чистую чашку
Петри с минеральной средой
Л
озина-
Л
озинского:
- затем односуточную (синхронизированную культуру) используют при тестировании.
Тестирование проб с испытуемыми тест-организмами проводят в чашках Петри вместимостью на 25 см3из
стекла или в микроаквариумах (блок-камерах) с рабочим объемом 4 см3из органического стекла, при этом плот
ность посадки на объем 10 см3 — 10 шт. тест-организмов, а на объем 4 см3 — 5 шт.
Микроаквариумы из органического стекла представляют собой две склеенные междусобой пластины разме
ром 20—21 х 7—8 см. В верхней плвстине толщиной примерно 1 см просверливают отверстия диаметром 3 см.
нижняя пластина толщиной примерно 0.5 см служитдном. В блоке — 12 камер (лунок), которые расположены вдва
ряда по шесть в каждом. В каждую лунку вносят по 5 тест-оргвнизмов. Пять рядов используют для различных кон
центраций. а шестой — для контроля. Сверху микроаквариум закрывают стеклянной пластинкой соответствующе
го размера, что препятствует испарению раствора.
В.2.2 Регулирование плотности популяции
Как правило, нет необходимости регулировать плотностьпопуляции тест-организмов при подготовке к тести
рованию.
В.2.3 Кормление
Суточные инфузории Paramecium caudatum Ehrenberg при тестировании не кормят.
В.З Условия культивирования маточной культуры Paramecium caudatum Ehrenberg
В.3.1 Для культивирования маточной культуры инфузорий Paramecium caudatum Ehrenberg удобны неболь
шие стеклянные емкости (например, чашки Петри) вместимостью 50 см3, плотность посадки — 100 шт. особей на
30 см3.
Появившуюсямолодь в необходимом количествеотсаживают вотдельные емкости. Когда вновь появившие
ся тест-организмы начинают размножаться, их снова пересаживают в чистые емкости с минеральной средой. Каж
дое поколение маркируют и на емкости ставят дату.
При культивировании и проведении тестирования необходимо поддерживать непрерывное размножение
тест-организмов, учитывая особенности биологического цикла их развития.
Длительное культивирование тест-организмов в лабораторных условиях позволяет устанввливать пределы
изменчивости основныхбиологических показателей в зависимостиотсезона. Воптимальныхусловиях содержания
выживаемость тест-организмов не зависит от времени года. Длительность культивирования тест-организмов в
лаборатории в оптимальных условиях не влияет на результаты опытов.
Этот вид предпочитает альфа-мезосапробные условия. Температурный оптимум лежит в пределах
24 ’"С—28 “С и предпочитает pH. близкую к нейтральной 6.5—7.5 ед. pH.
В.3.2 Кормление
Для корма маточной культуры Paramecium caudatum Ehrenbergиспользуютсухие активные гранулированные
пекарскиедрожжи по ГОСТ 28483 (вотличиеотевропейских — без консервантов), на которых происходит беспроб
лемное культивирование инфузорий.
П р и м е ч а н и е — Указанные дрожжи выпускает завод, который находится в Новосибирске. — ЗАО Компа
ния Проксима (тел. 3832 106-306. сайт в Интернете
www.proxlme.ru
). Дрожжи расфасованы в пакетики по 10 г.
инструкция по хранению написана на пакете. Для культивирования инфузорий достаточно одного пакетика в год.
Указанные выше пекарские дрожжи, предназначенные для кормления тест-организмов, хранят в закрытой
посуде при комнатной температуре от 20 аС до 25 аС. Вносят дрожжи в чашку Петри в очень небольшом количес тве
— по одной грануле.
П р и м е ч а н и е — Можно в качестве корма для инфузорий использовать очищенный дробленый рис. при
этом добавляют 3 зернышка в чашку Петри на объем 30 см3 питательной среды.
Рекомендуется регулярно просматривать состояние маточной культуры Paramecium caudatum Ehrenberg,
пересаживать на свежую минеральную среду и кормить через трое суток.