ГОСТ Р 57166—2016
Пример проведения предварительного тестирования и установления диапазона концентраций
вещества, в пределах которого необходимо проводить окончательное тестирование, приведен в А.2.1,
приложение А.
5.4.2 Окончательное тестирование
По результатам предварительного тестирования (см. 5.4.1) выбирают диапазон разбавлений
(концентраций) анализируемых проб для окончательного тестирования. При этом коэффициент между
разбавлениями (концентрациями), как правило, 2.0 или 2,5.
Для окончательного тестирования используют не менее пяти разбавлений (концентраций) анали
зируемых проб, при этом кратность разбавления (концентрации) проб необходимо, по возможности,
подбирать, основываясь на результатах предварительного тестирования, таким образом, чтобы обес
печить два уровня снижения выживаемости тест-организмов ниже и выше предполагаемого значения
Л
Кз^
Л
КРдо).
Для окончательного тестирования применяют не менее трех емкостей на каждую заданную крат
ность разбавления (концентрацию) анализируемой и контрольной проб и используют не менее 30
тест-организмов.
Процедура тестирования — no 5.4.3.
Пример проведения окончательного тестирования и установление значения средней летальной
концентрации 24 ч J1Kg0для вещества приведен в А.2.2 (приложение А).
П р и м е ч а н и е — Исходя из статистических данных, схема тестирования может быть изменена, напри
мер. уменьшено количество емкостей с анализируемыми пробами для каждого разбавления (концентрации) за счет
увеличения количества тестируемых разбавлений (концентраций) пробы и сокращения коэффициента между раз
бавлениями (концентрациями) анализируемой пробы.
5.4.3 Процедура тестирования
5.4.3.1 В каждую емкость (см. 5.4.1 и 5.4.2) вместимостью 25 см3для каждой исследуемой кон
центрации анализируемой пробы (разбавления) вносят по 10 см3анализируемой пробы, затем в каж
дую емкость помещают по 10 шт. односуточных тест-организмов.
П р и м е ч а н и е — Растворы концентраций веществ и разбавлений водных вытяжек объектов исследова
ния готовят в емкостях вместимостью не менее 50 см3. Затем каждый раствор заданной концентрации (разбавле
ния) по 10 см3 вносят в емкости вместимостью 25 см3, при этом используют по три емкости для каждой концентра
ции вещества (разбавления водной вытяжки).
5.4.3.2 Для каждой анализируемой пробы (разбавлений, концентраций) подготавливают кон
трольную пробу следующим способом: в емкости вместимостью 25 см3вносят по 10 см3минеральной
среды
Л
озина-
Л
озинского и помещают по 10 шт. односуточных тест-организмов. Для приготовления
контрольной пробы используют столько же емкостей, как идля приготовления исследуемых концентра
ций (разбавлений).
П р и м е ч а н и е — Плотность посадки тест-организмов при тестировании — 1 шт. на 1 см3.
5.4.3.3 Емкости с анализируемыми и контрольными пробами, подготовленными по 5.4.3.1,
5.4.3.2, помещают в климатостат.
5.4.3.4 Тестирование проводят в течение 6 ч (при необходимости 96 ч) (см. 5.1) в климатостате
при температуре (25
±
2) вС и попеременном воздействии света и темноты:
-16ч — при равномерном белом освещении в диапазоне от 500 до 1000 лк на расстоянии 0,35 м
от поверхности проб в емкостях:
-8 ч — при отсутствии освещения.
5.4.3.5 Через 6 ч тестирования под микроскопом (увеличение не менее чем в 50—100 раз) под
считывают количество выживших тест-организмов в каждой емкости (включая контрольную). Регистри
руют только подвижных инфузорий, а неподвижно лежащих на дне емкости инфузорий пастеровской
пипеткой удаляют. Если тестирование проводят в течение 96 ч. то подсчитывают выживших тест-орга
низмов через каждые 24 ч (48. 72 и 96 ч).
П р и м е ч а н и е
1 В процессе тестирования наблюдают за изменением движения, формы тела, пульсацией сократительной
вакуоли тест-организмов.
2 Показателем гибели тест-организмов служит деформация тела, разрыв пелликулы, лизис клетки.
3 Острыми летальными концентрациями считают такие концентрации, в которых гибнут 50 % или все
тест-организмы в течение 6 или 96 ч тестирования.
10