ГОСТ Р 57166—2016
Приложение В
(обязательное)
Культивирование и подготовка к тестированию тест-организмов
8.1 Условия культивирования тест-организмов. Общие требования
В.1.1 Исходный материал для культивирования тест-организмов Paramecium caudatum Ehrenberg получают
в лабораториях, занимающихся тестированием, имеющих культуру требуемой видовой принадлежности (или из
коллекций). Чувствительность культуры кмодельномутоксикантудвухромовокислому калию (5.3.2.4)должна соот
ветствовать установленному в настоящем стандарте диапазону
Л
К50 за 24 ч.
П р и м е ч а н и е — Тест-организмы — пресноводные инфузории Paramecium caudatum Ehrenberg допус
кается еыделятьиз природных водоемов. Выделение культуры проводят следующим способом: банкой вместимос
тью 1дм3 у самого берега зачерпывают воду с илом и как можно быстрее под микроскопом (увеличение а 100 раз)
просматривают пробы. Обнаруженных Paramecium caudatum Ehrenberg последовательно переносят в микроаква
риумы объемом сначала со смесью среды пробы и культуры а соотношении 2:1. затем увеличивают содержание
культуральной жидкости в микроаквариумах через каждый час и помещают в чистый минеральный раствор.
Для определения инфузорий используют «Определитель пресноводных беспозвоночных... «(Мажейкайсте,
1977)16].
Тест-организмы культивируют на минеральной среде
Л
озина-
Л
озинского исодержат в климатостате, инкуба
торе или в помещении с регулируемой температурой (25
±
2) °С.
При этом обеспечивают естественное или искусственное освещение так. чтобы соблюдались следующие
периоды: 16 ч — воздействие света при освещенности 500—1000 пк. 8 ч — без воздействия света (в темноте).
Тест-организмы Paramecium caudatum Ehrenberg необходимо защищатьот воздействия прямого солнечного
света.
Тест-организмы иминеральная среда, вкоторойпроводят их культивирование,должны содержаться вемкос-
тях только из стекла.
Емкости, применяемыедля культивирования тест-организмов,должны бытьоснащены свободными или пер
форированными крышками, чтобы уменьшить испарение, но обеспечить газообмен.
Емкости тщательно моют при каждой замене минеральной среды.
В качестве корма используют сухие пекарские дрожжи. Сухие пекарские дрожжи, предназначенные для кор
мления тест-организмов, хранят при комнатной температуре от 20 *С до 25 *С не более одного года.
П р и м е ч а н и я
1 Тест-организмы — пресноводные инфузории Paramecium caudatum Ehrenberg имеют широкое географи
ческое распространение,обладают коротким жизненным циклом и требуют минимум пространства иоборудования
для культивирования ипроведения тестирования. Тест-организмы могут культивироваться постоянно влаборатор
ных условиях.
2 Короткийжизненный цикл, быстрота размножения позволяют проследитьреакцию на интоксикацию вотно
сительно короткий срок в длинном ряду поколений. Используя принцип клонирования, можно получить большое
количество генетически однородного материала.
3 Размножение инфузорий Paramecium caudatum Ehrenberg происходит путем продопьного деления взрос
лого организма пополам в течение 1суток. Темп деления инфузорий 1—2 шт. в сутки.
Для экспериментов используют клональные культуры инфузорий Paramecium caudatum Ehrenberg.
Клон выводят следующим способом: одну особь освобождают от посторонней микрофлоры путем последо
вательной пересадки через несколько микроаквариумовс минеральной средой иоставляютдля размножения. Ког да
количество разделившихся инфузорий становится достаточным (30—40 шт.). их пересаживают в емкость со
средой
Л
озина-
Л
озинского.
Полученную таким способом культуру инфузорий Paramecium caudatum Ehrenberg адаптируют к заданной
температуре в течение 3—4 недель при температуре 24 *С—25 ‘С — в термостате, при 12 ‘С—13 ‘С и 4
“С—5 “С — в холодильниках.
Колебания температуры не должны превышать =1 °С.
Для поддержаниястандартныхусловийкультивирования попьзуются культурой в стационарнойфазе роста.
В.1.2 Культивирование инфузорий проводят следующим способом: 8 чашку Петри вместимостью S0 см3 с
минеральной средой
Л
озина-
Л
озинского (объем среды 30 см3) вносят 100 шт. инфузорий Paramecium caudatum
Ehrenberg из маточной культуры и добавляют корм (одну гранулу сухих дрожжей на данный объем). Выращивают
инфузории (при постоянной температуре (24
±
2) *С и освещенности 500—1000 лк) в течение 3 сут. Через 3сут. ког
да плотностьинфузорий Paramecium caudatum Ehrenbergобычнодостигаетмаксимума. культуру инфузорий Пасте
ровской пипеткой пересаживают в чистую чашку Петри с минеральной средой
Л
озина-
Л
озинского в количестве 100
шт. на 30 см3и снова добавляют корм. Таким способом получают культуру инфузорий Paramecium caudatum
Ehrenberg. предназначенную для культивирования. Культура инфузорий Paramecium caudatum Ehrenberg очень
18