ГОСТ 31955—2012
Приложение В
(обязательное)
Методики приготовления культуральных сред и реактивов
В.1 Лактозный ТТХ агар с гептадецилсульфатом натрия (среда с тереитолом 7)
В.1.1 Базовая среда
Состав:
лактоза —
20
г.
пептон — Ю г;
дрожжевой экстракт —
6
г;
мясной экстракт — 5 г;
бромтимоповый синий — 0,05 г;
агар {в форме порошка или хлопьев) — 15—20 г;
дистиллированная вода — 1000МЛ,
П р и м е ч а н и е — Массу агара выбирают в зависимости от его свойств к гелеобраэованию.
Растворяют все указанные ингредиенты в дистиллированной воде при нагревании. Устанавливают значение
pH таким образом, чтобы после стерилизации оно было равно (7,2 г 0.1) при температуре 25 ‘С.
Разливают полученную среду в емкости вместимостью не более 250 мл и стерилизуют в течение 15 мин при
температуре (121 ± 3) "С.
В.1.2 Раствор 2 ,3 .5-трифенилтетразолиум хлорида (ТТХ)
Состав:
2.3. 5-трифенилтетразолиум хлорид (ТТХ) — 0.05 г;
дистиллированная вода —
100
мл.
Растворяют ТТХ в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем дистиллированной
водой до 100 мл. Стерилизуют раствор фильтрацией через мембрану с номинальным размером пор 0.2 мкм.
В.1.3 Раствор гептадецилсульфата натрия
Состав:
гептадецилсульфат натрия (тергитол 7) — 0.2 г;
дистиллированная вода —
100
мл.
Растворяют гептадецилсульфат натрия (тергитол 7) в небольшом количестве дистиллированной воды
и доводят объем дистиллированной водой до 100 мл. Раствор стерилизуют в течение 15 мин при температуре
(121 ± 3) ‘ С.
В.1.4 Среда полного состава
Состав:
базовая среда (см. В.1.1)— 100 мл;
раствор ТТХ (см. В.1.2) — 5 мл;
раствор гептадецилсульфата натрия (см. В.1.3) — 5 мл.
Расплавляют базовую среду (см. В.1.1) и охлаждают до температуры (50 ± 5) аС. Соблюдая стерильность,
добавляют в колбу с охлажденной базовой средой растворы ТТХ (см. В.1.2) и гептадецилсульфата натрия (см.
В.1.3), тщательно перемешивают, избегая образования пузырей, затем разливают в чашки Петри собразова-нием
слоя толщиной не менее 5 мм. Полученную среду хранят в защищенном от света месте при температуре (5 ± 3) *С
не более 10 сут.
В.2 Триптофановый бульон
Состав:
казеин трипсиновой ферментации — Ю г;
L-триптофан — 1 г;
натрий хлористый — 5 г;
дистиллированная вода — до
1000
мл.
Указанные ингредиенты растворяют при нагревании а дистиллированной воде и разливают по 3 мл в пробир
ки. Затем стерилизуют в течение 15 мин при температуре (121 ± 3) *С. Значение pH готовой к использованию сре
ды — (7,5 х 0.1) при температуре25 ‘С.
П р и м е ч а н и е — Если результаты контроля* качества среды показывают достаточное количество
L-триптофана в используемом казеине трипсиновой ферментации, то его в среду не добавляют, а дополнительно
вносят
10
г казеина трипсиновой ферментации.
• В Российской Федерации контроль качества среды проводят согласно (2).
9