ГОСТ 31955—2012
8.3.3 Оксидазмый и имдольмый тесты
Для подтверждения наличия впробелитьевой водыколиформных бактерий иE.cohпроводят пере
сев всех или представительного количества (не менее 10) характерных изолированных колоний микро
организмов (имеющих окраску по 8.3.2) в чашки Петри на неселективный трилтон-соевый агар (ТСА),
приготовленный по В.З (приложение В)методом, позволяющим получить изолированные колонии, и в
пробирки втриптофановый бульон, приготовленный no В.2 (приложение В).
Инкубируют посевы микроорганизмов на неселективном ТСА в чашках Петри при температуре
(36 ♦ 2) вС втечение (21
1
3) ч и выполняют оксидазный тест следующим способом.
Две. три капли свежеприготовленного по В.5.3 (приложение В) реактива для оксидазного теста
помешают на фильтровальную бумагу. Затем стеклянной палочкой,деревяннымаппликатором, пласти
ковой или платиновой бактериологической петлей растирают часть колоний микроорганизмов на обра
ботанной реактивом фильтровальной бумаге. Появление насыщенной сине-фиолетовой окраски в
течение 30 с считают положительной оксидазной реакцией, указывающей на оксидазную активность.
Отсутствие изменения окраски указывает на отсутствие оксидазной активности (отрицатель
нуюоксидазнуюреакцию).
В случавростана неселективном ТСА колонийразной морфологии, оксидазныйтест выполня
ют на 2—3 колониях каждого типа.
Все колонии микроорганизмов,дающие отрицательную оксидазную реакцию, учитывают как коло
нии колиформных бактерий иподсчитывают их.
Инкубируют посев микроорганизмов в пробирке с триптофановым бульоном, приготовленным
по В.2 (приложение В), при температуре (44.0 ± 0.5) °С в течение (21
1
3) ч. после чего определяют
образование индола путем добавления 0,2—0.3 мл реактива Ковача, приготовленного по В.5.1 (прило
жение В).
Образование вишнево-красной окраски наповерхноститриптофанового бульонасчитают положи
тельной индольной реакцией, подтверждающей образование индола.
Все колонии микроорганизмов, дающие отрицательную оксидазную реакцию и положительную
индольную реакцию, учитывают как колонии Е.соЧи подсчитывают их.
При использовании коммерческих тест-систем выполнение оксидазного и индольного тестов
осуществляют согласно инструкциям изготовителя.
П р и м е ч а н и я
1 В особых случаях может быть проведена идентификация колиформных бактерий, например для разделе
ния бактерий, имеющих фекальное и нефекальное происхождение.
2 В особых случаяхпри обнаружении выросших по 8.3.1 колоний, не имеющих характерной окраски по 8.3.2
и не обладающих оксидазной активностью, может бы ть проведена ох идентификация на принадлежность к бак
териям семейства Enterobacleriaceae по методикам, разработанным и аттестованным в установленном
порядке.
8.3.4 Допускаетсяпроводить одновременноеопределениеоксидазнойактивностивсехвырос
ших на среде Эндо по 8.3.1 колоний микроорганизмов непосредственно на мембранном фильтре без
пересева по 8.3.3. Для этого в чашкуПетри помещают фильтровальную бумагу иобильно смачива
ют реактивом для оксидазного теста тетрамвтилом-р-фвнилендиамином. приготовленным по
варианту 1[см. В.5.3 (приложение В)]. Затем переносят стерилизованным пинцетом мембранный
фильтр с выросшими на нем по 8.3.1 колониями микроорганизмов на фильтровальную бумагу. Появ
ление насыщенной сине-фиолетовой окраски всей колонии или ее ободка в течение 1— 4мин
счита ют положителыюй оксидазнойреакцией, указывающей на оксидазную активность.
Приработе среактивом для оксидазного теста (диметил-р-фенилендиамином). приготовлен
ным по варианту 2 [см. В.5.3 (приложение В)], мембранный фильтр с выросшими на нем колониями с
питательной средой перекладывают на кружок фильтровальной бумаги, обильно смоченный дан
ным реактивом для оксидазного теста. При появлении первых признаков положительной
реакции (синев окрашиваниеколоний), ноне болев чем через 4 мин. в случав необходимости
дальнейшей иден тификации оксидазоотрицатвльных бактерий мембранный фильтр переносят
обратно на пита тельную сроду. Пересев колоний на подтверждающие среды целесообразно
проводить но сразуже после проявления реакции, а после выдерживания на питательной среде
свыше 5 мин.
Колониимикроорганизмов, дающие положительную оксидазную реакцию, не учитывают. Коло
нии. но изменившие окраски (отрицательная оксидазная реакция), учитывают как колонии коли
формных бактерий иподсчитывают их.
6