ГОСТ Р 57202—2016
Питательную среду готовят следующим образом:
200г сухих семян фасоли замачивают300см3воды втечениесуток, затем вразмельчителе тканей
РТ-1 размельчают до образования однородной кашицы. Постоянно помешивая, добавляют последо
вательно следующие компоненты:
- 15 г дрожжей,
- 12 г сахарозы,
- 3г метабена, растворенныхв 10 см3этилового спирта,
- 4 г калия фосфорнокислогодвузамещенного,
- 5см340 %-ного раствора формалина,
- 9 г стерильной, измельченной в электрокофемолке фильтровальной бумаги, на которую выли
вают расплавленный, охлажденный до температуры 70 °С агар (15 г микробиологического агар,
расплавленного в 350 см3воды).
Смесьохлаждаютдо температуры 40 °С. вносят 4 г аскорбиновой кислоты и перемешивают.
Питательную среду разливают в стерильные банки, закрывают стерильной бумагой и хранят при
температуре 5 еС неболее 14дней.
5.6.2.10 Первых перелинявших на 2-й возраст гусениц, количество которых не более 5 % от отро
дившихся. выбраковывают. Массовый выбор тест-объекта проводят на 2—3 день после начала линьки
вручную.
5.6.3 Проведение испытания
Готовятпараллельные водныесуспензии контрольногообразца вбитоксибациллина израсчета 1 г
препарата и 99 г воды в пяти концентрациях: 0.25; 0,06; 0.016; 0.004: 0.001 %, обеспечивающих гибель
тест-объекта от (15 ± 56) до (85 i 5) %.
Исходную 0,25 %-ную суспензию готовят с помощью размельчителя тканей РТ-2 при скорости
3000 об/мин в течение 2 мин. а суспензию других концентраций — путем последовательных четырех
кратных разведений.
Каждую концентрацию битоксибациллина испытывают в трехпараллельныхопределениях.
3см3суспензиикаждой концентрации тщательноперемешивают с 15г питательнойсреды вступке
до полученияоднородной массы.
Полученную массу раскладывают на внутреннюю поверхность крышки чашки Петри по (5 i 1) г в
каждую. Туда же помещают по 15 гусениц второго возраста. Одновременно ставят контрольный опыт в
трех параллельных определениях:
- 15 гпитательнойсреды перемешиваютс 3 см3воды иполученную массураспределяютв 3чашки
Петри, в каждую из которых помещаютпо 15 гусениц. Чашки Петри с гусеницами помещаютв термостат
и выдерживают при температуре (21 ± 1) °С. Количество погибших гусениц подсчитывают на 6 сутки.
5.6.4 Обработка результатов
Гибель гусениц (Х3) в долях с поправкой на гибель в контрольном опыте вычисляютотдельно для
каждой концентрации битоксибациллина по формуле Аббота (2):
х-Р
*з =
ро-Р .
/
(
2
)
где Р0— доля мертвых особей в опыте (среднееарифметическое трех параллельных определений);
Р, — доля мертвыхособей вконтроле(среднееарифметическоетрехпараллельныхопределений).
На основании пол ученныхданных вычисляютЛ К50поформуле Кербера впроцентахконцентрации
битоксибациллина в суспензии или вмг битоксибациллина на 1г корма, формула (3):
1дЛК50= 1дСм-Сх(]ГХ3-0,5).(3)
где См — максимальная из испытанных концентраций;
G — логарифмы отношения предыдущей концентрации к последующей (логарифм кратности раз
ведения).
Пополученнымданным вычисляют биологическую активность (ЕА) в ЕА/мг. формула4.
ЕА
•2700.
ЛКИ контрольного образца
И)
ЛК.. испытуемого битоксибациллина
5.7 Определение стабильности 1 %-ной водной суспензии
Методопределения стабильности вднойсуспензии по ГОСТ 16484.
5.7.1 Аппаратура, материалы, реактивы по ГОСТ 16484:
- весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взве
шивания 200 гпо ГОСТ 24104или других аналогичных марок;
7