ГОСТ ISO 13366-1—2014
трация борной кислоты не должна превышать 0.6 г на 100 см3 анализируемой пробы. Максимальная
концентрация бронопола не должна превышать 0.05 г на 100 см3анализируемой пробы. Максимальная
концентрация дихромата калия не должна превышать 0.1 г на 100 см3анализируемой пробы. Срок хра
нения консервированных проб при температуре (4 ± 2) °С — не более 6 дней.
Во избежание негативного влияния на экологическую обстановку рекомендуется ограничить ис
пользование дихромата калия в пробах, для которых предусмотрен только длительный срок хранения.
7.2 Подготовка пробы
Анализируемую пробу (см. 7.1) нагревают на водяной бане (см. 5.1) до температуры 40 °С. Про
бу тщательно перемешивают. Охлаждают пробу до температуры, на которую калиброван микрошприц
(см. 5.4), например до 20 °С.
Разводят анализируемые пробы с предполагаемым количеством соматических клеток выше
1 000 000 клеток/см3 фосфатно-буферным раствором (см. 4.2). чтобы получить количество соматиче
ских клеток около 500000 клеток/см3 в каждой разведенной анализируемой пробе.
где d — коэффициент разведения для получения в анализируемой пробе содержания соматических
клеток около 500000 клеток/см3;
Vs — объем анализируемой пробы, см3;
Vb — объем буферного раствора, используемого для разведения анализируемой пробы, см3.
Записывают надлежащий коэффициент разбавления, d, объем анализируемой пробы. Vs. и объ
ем буферного раствора. Vb, используемые для получения требуемого разведения.
8Проведение определения
Для каждой анализируемой пробы приготовляют как минимум два мазка (см. 8.1) и отбирают луч
ший из них (например, мазок, не поврежденный в процессе окрашивания). Погружают предметные стек
ла (см. 5.6) в этанол (95 % по объему). Стерилизуют пламенем и охлаждают.
8.1 Приготовление мазка и окрашивание
Приготовление мазка и окрашивание проводят в соответствии с 8.1.1 или 8.1.2.
П римечание — Окрашивание мазка козьего молока приведено в приложении В.
8.1.1 Приготовление мазка и окрашивание окрашивающим раствором Newman-Lampert
Микрошприцем (см. 5.4) отбирают 0.01 см3анализируемой пробы (разведенной соответствующим
образом) (см. 7.2). Промывают микрошприц анализируемой пробой. При необходимости тщательно и
аккуратно очищают внешнюю сторону микрошприца, которая контактировала с анализируемой пробой.
Пробу помещают на чистое предметное стекло площадью 1 см2 (см. 5.6). Используя иглу, равно
мерно распределяют анализируемую пробу на всей указанной поверхности, при этом контролируют,
чтобы площадь, прилегающая к внешним границам, была также равномерно покрыта. Мазок подсуши
вают при комнатной температуре до состояния полной сухости.
Погружают высушенный на предметном стекле мазок в модифицированный окрашивающий рас
твор Newman-Lampert (см. 4.1.1) не менее чем на 15 мин. Мазок высушивают при комнатной температуре.
Затем мазок осторожно промывают водопроводной водой для удаления излишков краски. Опять
высушивают и хранят, защищая от пыли.
8.1.2 Окрашивание с использованием окрашивающего раствора этидиум бромида и при
готовление мазка
Смешивают 1 см3 подготовленной анализируемой пробы (см. 7.2) с 1 см3 окрашивающего рабо
чего раствора бромида этидия (см. 4.1.2.3) в пробирке. Смесь хранят в защищенном от света месте.
Нагревают пробирку на водяной бане (см. 5.1) при температуре 50 °С в течение 3 мин. Охлаждают до
комнатной температуры.
При помощи микрошприца (см. 5.4) отбирают 0.01 см3 смеси. Микрошприц промывают смесью.
При необходимости тщательно и аккуратно очищают внешнюю сторону микрошприца, которая контак
тировала со смесью.
4