ГОСТ 33635— 2015
Приложение А
(рекомендуемое)
Рекомендации по культивированию
Chironomus riparius
1Личинки
Chironomus
культивируют в кристаллизационных чашках или более крупных контейнерах. Мелкий
кварцевый песок распределяют слоем высотой примерно 5-10 см над дном контейнера. Было показано, что
кизельгур (например. Merck. Art 8117) является подходящим субстратом (достаточным является более тонкий
слой в несколько мм). Затем добавляют соответствующую требованиям воду на высоту несколько см. Уровень
воды пополняют при необходимости для восстановления потерь в результате испарения и предупреждения вы
сыхания. Воду заменяют при необходимости. Проводят легкую аэрацию. Сосуды с культивируемыми личинками
находятся в подходящей камере, которая будет предупреждать вылет вылупившихся взрослых особей. Камера
должна быть достаточно большой, чтобы обеспечить роение вылупившихся взрослых особей, иначе не будет про
исходить копуляция (минимальный размер составляет примерно 30 * 30 * 30 см).
2 Камеры находятся при комнатной температуре или при постоянной температуре окружающей среды
(20 ± 2) *С со световым периодом 16 ч свет (интенсивность примерно 1000 лк). 8 ч — темнота. Имеются данные,
что влажность воздуха менее 60 % относительной влажности может тормозить репродукцию.
Вода для разведения
3 Используют любую соответствующую требованиям природную или искусственную воду. Обычно использу
ют колодезную воду, дехлорированную водопроводную воду и искусственные среды (например, среда Elendt «М4»
или «М7», см. ниже). Перед применением воду аэрируют. При необходимости культуральную воду обновляют, осто
рожно сливая или откачивая использованную воду из сосудов для культивирования, не нарушая трубочек личинок.
Кормление личинок
4 Личинок
Chironomus
кормят хлопьевидным кормом для рыб (Tetra Min®. Telra Phylf8’ или кормом для рыб
другой аналогичной марки) из расчета примерно 250 мг на сосуд в сутки. Корм вносят в виде сухого размельчен
ного порошка или в виде суспензии в воде: 1.0 г хлопьевидного корма добавляют к 20 мл воды для разведения и
перемешивают для получения однородной смеси. Такую суспензию скармливают из расчета 5 мл на сосуд в сутки
(перед использованием встряхивают). Личинки более старшего возраста получают большее количество корма.
5 Кормление корректируют в зависимости от качества воды. Если культуральная среда становится «мутной»,
то количество вносимого корма уменьшают. Добавление корма тщательно контролируют. Слишком малое количе
ство корма будет вызывать переселение личинок по водной колонке, а слишком большое количество корма будет
вызывать повышенную микробиологическую активность и снижение концентрации кислорода. Оба фактора могут
приводить к пониженным скоростям роста.
6 При закладке новых сосудов для культивирования также можно добавлять некоторые зеленые водоросли
(например. Scenedesmus subspicatus, Chloreila vulgaris).
Кормление вылупившихся взрослых особей
7 Некоторые экспериментаторы предложили использовать ватные палочки, пропитанные насыщенным рас
твором сахарозы, служащие в качестве корма для вылупившихся взрослых особей.
Вылуплемие
8 При температуре (20 ± 2) "С взрослые особи начинают вылупляться в сосудах с культивируемыми личин
ками примерно через 13-15 сут. Самцов легко отличить по перистым усикам.
Кладки яиц
9 После появления взрослых особей внутри камеры для культивирования все сосуды для культивирования
личинок тщательно осматривают три раза в неделю на отложение студенистых кладок яиц. Если они присутствуют, то
кладку яиц осторожно удаляют. Ее переносят в небольшую чашку, содержащую пробу воды для культивирова ния.
Кладку яиц используют для закладки нового сосуда для культивирования (например. 2-4 кладки яиц/сосуд) или
используют для испытания токсичности.
10 Личинки первой стадии развития вылупляются через 2-3 сут.
Закладка новых культуральных сосудов
11 После получения культур закладывают новые сосуды для культивирования личинок каждую неделю или
реже в зависимости от требований испытания, удаляя более старые сосуды после вылупления взрослых комаров.
Используя такую систему, можно получить регулярную продукцию взрослых особей при минимальных усилиях.
Получение испытуемых растворов «М4» и «М7»
12 Elendt (1990) описал среду «М4». Среду «М7» готовят, как и среду «М4», за исключением веществ, при
веденных в таблице А.1. концентрации которых в четыре раза ниже в среде «М7». чем в среде «М4». В литературе
описано приготовление среды «М7» (Eiendt. персональное сообщение). Испытуемый раствор не следует готовить в
соответствии с Elendt и Bias (1990) для концентраций NaSi03 • 5Н20 . NaNOj. КН2Р 04 и К2НР04, которые не под ходят
для приготовления стоковых растворов.
10