ГОСТ 33635— 2015
требуется для личинок более старшего возраста: 0,5-1 мг на личинку в сутки является достаточным для
остального периода испытания. Количество корма снижают во всех обработках и контроле, если отме чен
рост грибов или в контроле наблюдается гибель личинок. Если невозможно остановить рост грибов, то
испытание повторяют заново. При испытании веществ с высокой адсорбирующей способностью (на
пример, с log КОЛ. > 5) или веществ, ковалентно связывающихся с осадком, количество корма, необхо
димое для обеспечения выживаемости и естественного роста организмов, добавляют к искусственному
осадку до периода стабилизации. Для этого используют растительный материал вместо корма для рыб,
например добавляют 0.5 % (сухая масса) мелко измельченных листьев жгучей крапивы (
Urtica dioeca),
шелковицы (
Mows alba),
клевера ползучего или белого
(Trifolium repens),
шпината (
Spinacia oleracea)
или другого растительного материала (
Cerophyl
или аотфа-целлюлоза).
9.1.8 Условия инкубации
9.1.8.1 Проводят легкое аэрирование надосадочной воды в испытуемых сосудах предпочтительно
в течение 24 ч после внесения личинок и продолжают в течение всего испытания (следует соблюдать
осторожность в отношении того, что концентрация растворенного кислорода не должна снижаться
ниже 60 % ASV). Аэрацию проводят через стеклянную пастеровскую пипетку, зафиксированную на 2
-3 см выше слоя осадка (т. е. один или несколько пузырьков/сек). В случае испытания летучих
химических веществ аэрацию системы осадок — вода не проводят.
9.1.8.2 Испытание проводят при постоянной температуре (20 ± 2) вС. Для
С. tentas
и
С. yoshimatui
рекомендуются температуры соответственно (23 ± 2) °С и (25 ± 2) °С. Используют 16-часовой световой
период, и интенсивность света должна составлять от 500 до 1000 лк.
9.1.9 Продолжительность воздействия
Воздействие начинается с внесения личинок в обогащенные и контрольные сосуды. Максимальная
продолжительность воздействия составляет 28 сут для С.
riparis
и
С. yoshimatui
и 65 сут для
С. tentas.
Если комары вылупляются раньше, то испытание можно закончить минимум через 5 сут после вылу-
пления последней взрослой особи в контроле.
9.2Наблюдения
9.2.1 Вылуплоние
9.2.1.1 Определяют время вылупления и общее количество полностью вылупившихся комаров
(самцов и самок). Самцов легко определить по их перистым усикам.
9.2.1.2 Испытуемые сосуды осматривают не менее трех раз в неделю для визуальной оценки любого
аномального поведения (например, выход из осадка, аномальное плавание) по сравнению с контролем. В
период предполагаемого вылупления ежедневно подсчитывают количество вылупившихся комаров.
Каждый день определяют пол и количество полностью вылупившихся комаров. После идентификации
комаров извлекают из сосудов. Регистрируют любые кладки яиц. остающиеся до окончания испытания, а
затем их удаляют для предупреждения повторного внесения личинок в осадок. Также регистрируют число
видимых невылупившихся куколок. Руководство по определению вылупления приведено в приложении Г.
9.2.2 Рост и выживаемость
Если представляют данные по выживаемости и росту личинок за первые 10 сут. то в начале испы
тания в общее число испытуемых сосудов включают дополнительные сосуды, чтобы их можно было ис
пользовать в дальнейшем. Осадок из этих дополнительных сосудов просеивают через сито с размером
отверстий 250 мкм. которое задерживает личинки. Показателями гибели личинок является неподвиж
ность и отсутствие реакции на механическое раздражение. Также подсчитывают количество личинок,
которых не удалось обнаружить, и их относят к мертвым (личинки, которые погибли в начале испыта
ния. могли подвергнуться микробному разложению). Определяют (беззольную) сухую массу выжив
ших личинок на испытуемый сосуд и рассчитывают среднюю индивидуальную сухую массу на сосуд.
Рекомендуется определить возраст выживших личинок; для этого измеряют ширину головной капсулы у
каждой особи.
9.3 Аналитические определения
9.3.1 Концентрация испы туемого вещества
9.3.1.1 Перед началом испытания (т. е. перед внесением личинок) отбирают пробы объемного
осадка не менее чем из одного обработанного сосуда для аналитического определения концентрации
испытуемого вещества в осадке. В начале испытания анализируют как минимум пробы надосадочной
воды, поровой воды и осадка (см. 9.1.2), а в конце испытания анализу подвергают указанные пробы
только при самой высокой концентрации и при одной более низкой концентрации. Результаты опреде-
6