ГОСТ 33635— 2015
9.1.2 Стабилизация
После приготовления обогащенного осадка с надосадочной водой требуется обеспечить проник
новение испытуемого вещества из осадка в водную фазу [3]. [4]. [6]. [13]. Предпочтительно это проводят
при температуре и аэрации, используемых при испытании. Соответствующее время уравновешивания
является специфическим для осадка и химического вещества и может находиться в пределах от не
скольких часов до суток, а в редких случаях до нескольких недель (4 -5 нед). Поскольку за это время
может произойти деградация многих химических веществ, то не ожидают окончания уравновешивания, но
рекомендуемый период уравновешивания обычно составляет 48 ч. В конце этого дополнительного
периода уравновешивания определяют концентрацию испытуемого вещества в надосадочной жидко
сти. поровой воде и осадке по меньшей мере при самой высокой концентрации и при одной более
низкой концентрации (см. 9.3.1.1). Данные аналитические измерения испытуемого вещества позволяют
рассчитать массовый баланс и выразить результаты на основе установленных концентраций.
9.1.3 Внесенио тестовы х организмов
9.1.3.1 За 4 -5 сут до внесения тестовых организмов в испытуемые сосуды отбирают кладки яиц
из культур и помещают в небольшие сосуды с культуральной средой. Используют выдержанную среду
из исходной культуры или свежеприготовленную среду. При использовании последней в культураль
ную среду добавляют небольшое количество корма, например зеленые водоросли и/или несколько
капель фильтрата мелко измельченной суспензии хлопьевидного корма для рыб (см. приложение А).
Используют только недавно отложенные кладки яиц. Обычно личинки начинают вылупляться через
пару суток после кладки (2 -3 сут —
Chironomus riparius
при 20 °С, 1 -4 сут —
Chironomus tentans
при 23
°С и
Chironomus yoshimatui
при 25 ЭС), и рост личинок происходит в четыре стадии развития, каждая
продолжительностью 4 -8 сут. В испытании используют личинок первой стадии развития (2 -3 или 1-4 сут
после вылупления). Стадию развития комаров определяют по ширине головной капсулы [6].
9.1.3.2 В каждый испытуемый сосуд, содержащий обогащенный осадок и воду, произвольно вносят
20 личинок первой стадии развития, используя пипетку с тупым кончиком. Аэрацию воды останавливают во
время внесения личинок в испытуемые сосуды и еще на 24 ч после этого (см. 9.1.3.1 и 9.1.8.1). Согласно вы
бранному дизайну испытания (см. 8 .1.2 и 8.2.1) количество используемых личинок на каждую концентрацию
составляет не монео 60 для установления точки ЕС и не менее 80 для установления NOEC.
9.1.4 Испы туемы е концентрации
9.1.4.1 Испытание по подбору диапазона концентраций необходимо для определения диапазона
предельных концентраций в конечном испытании. Для этой цели используют ряд широко разнесенных
концентраций испытуемого вещества. Для обеспечения одинаковой плотности хирономид на поверхно
сти, используемой для конечного испытания, хирономиды подвергают воздействию каждой концентра
ции испытуемого вещества в течение периода времени, позволяющего установить соответствующие
испытуемые концентрации, и для этого не требуется повторности.
9.1.4.2 Испытуемые концентрации для конечного опыта определяют на основе результатов испы
тания по подбору диапазона концентраций. Используют и выбирают не менее пяти концентраций, как
описано в 8.1.1- 8 .2 .1.
9.1.5 Контроли
В испытание включают контрольные сосуды, не содержащие испытуемого химического вещества,
но содержащие осадок, при соответствующем количестве повторностей (см. 8.1.2-8.2.1). В том случае,
если использован растворитель для внесения испытуемого вещества (см. 7.5.1). следует добавить
кон троль на растворитель с осадком.
9.1.6 Тест-система
Используют статические системы. В исключительных случаях используются полустатические или
проточные системы с периодическим или постоянным обновлением надосадочной воды, например,
если показатели качества воды становятся непригодными для тестового организма, или нарушается
химическое равновесие (например, уровни растворенного кислорода падают слишком низко, концен
трация выделенных продуктов повышается слишком высоко или минеральные вещества вымываются из
осадка и влияют на значение pH и/или жесткость воды). Однако подходят и могут быть предпочти
тельными другие методы улучшения качества надосадочной воды, такие как аэрация.
9.1.7 Корм
Личинок кормят предпочтительно каждый день или не менее трех раз в неделю. Корм для рыб (су
спензия в воде или мелко измельченный корм, например Tetra-Min или Tetra-Phyll: подробное опи
сание см. в приложении А) в количестве 0,25-0,5 мг (0,35-0,5 мг для С.
yoshimatui)
на личинку в сутки
является достаточным для личинок раннего возраста в течение первых 10 сут. Немного больше корма
5