ГОСТ 33637—2015
Приложение Г
(рекомендуемое)
Виды земляных малощетинковых червей, рекомендованные для использования в испытаниях
по биоаккумуляции в почве
Земляные черви
Рекомендуемымтестовым видом является Eiseniafetida (Savigny 1826), относящийся к семейству Lumbricidae.
С 1972 он подразделяется на два подвида (Eisenia fetida и Eisenia andrei (62J). Согласно Jaenike (63] они являются
истинными типичными, отдельными видами. Eisenia fetida легко распознается по его ярким межсегментным жел
тым полоскам, тогда как Eisenia andrei имеет равномерный, темно-красный цвет. Происходя, вероятно, из региона
Черного моря, на сегодняшний день они распространены по всему миру, особенно в антропогенно
измененных местах обитания, таких как компостные кучи. Оба вида используются в экотоксикологических
испытаниях, а также в исследованиях по биоаккумуляции.
Eisenia fetida и Eisenia andrei являются промышленно доступными, например, как наживка для рыб. По срав
нению с другими земляными червями они имеют короткий жизненный цикл, достигая зрелости в течение примерно
2—3 мес (при комнатной температуре). Оптимальная температура для них составляет примерно 20 ”С — 24 *С.
Они предпочитают сравнительно влажные субстраты с почти нейтральным pH и высоким содержанием органиче
ского материала. Так как эти виды широко использовались в стандартных экотоксикологических испытаниях на
протяжении примерно 25 лет. то их культивирование хорошо известно [36], [64].
Оба вида могут быть культивированы в широком диапазоне отходов животноводства. Рекомендованной ИСО
[61] средой для разведения является смесь 50:50 навоза от лошадей или крупного рогатого скота и торфа. Среда
должна иметь значение pH примерно от 6 до 7 (регулируется карбонатом кальция), низкую ионную
проводимость (менее 6 мСм/см или менее 0,5 % концентрации соли) и не должна быть чрезмерно загрязненной
аммиаком или мочой животных. Также может быть использована промышленная садовая почва без добавок или
искусственная почва в соответствии с OECD [36]. или их смесь всоотношении 50:50. Субстрат должен быть
влажным, но не очень мокрым. Для разведения подходят коробки вместимостью от 10до 50 л.
Для получения червей стандартного возраста и массы лучше всего начинать культуру с коконов. Для этого
взрослых червей вносят в коробки, предназначенные для разведения, содержащие свежий субстрат для получе
ния коконов. Практический опыт показывает, что плотность популяции около 100 взрослых червей на кг субстрата
(сырой массы) обеспечивает подходящую скорость размножения. Через 28 сут взрослых червей удаляют. Земля
ные черви, вылупившиеся из коконов, используются для испытания, когда достигают половой зрелости, не менее
чем через 2 мес. но менее чем через 12 мес.
Черви видов, описанных выше, можно считать здоровыми, если они активно двигаются в субстрате, не пы
таются покинуть субстрат и непрерывно размножаются. Очень медленное движение или желтый задний конец (в
случае Eisenia fetida) указывают на истощение субстрата. В этом случав рекомендуется освежить субстрат и^или
снизить количество червей в коробке.
Энхитреиды
Рекомендуемым тестовым видом является Enchytraeus aibidus Henle 1837 (белые энхитреиды). Enchytraeus
albidus является одним из самых крупных (до 15 мм) видов кольчатых малощетинковых червей семейства
Enchytraeidae и распространенным во всем мире [65]. Enchytraeus albidus обитают в морской, озерной и наземной
среде, восновном в разлагающихся органических веществах (водоросли, компост) и редко в лугах [66]. Эта широ кая
экологическая толерантность и некоторые морфологические изменения показывают, что могут существовать
различные и золягы этого вида.
Enchytraeus albidus является промышленно доступным, продается в качестве корма для рыб. Следует про
верить загрязненность культуры друтими. как правило, более мелкими видами [67]. Если происходит загрязнение, то
всех червей следует промыть водой в чашке Петри. Затем отбирают крупные взрослые особи из Enchytraeus
albidus (при помощи стереомикроскопа), чтобы заложить новую культуру. Всех остальных червей отбрасывают. Их
жизненный цикл является коротким, так как половозрелое состояние достигается между 33 сут (при 18 "С) и 74 сут
(при 12 “С). Для испытания используют только культуру, которая сохраняется влаборатории в течение не менее 5
недель (одно поколение) без каких-либо проблем.
Другие виды рода Enchytraeus также подходят, особенно Enchytraeus luxuriosus. Этот вид является типичным
обитателем почвы, который был недавно описан в [68]. Если используются другие виды Enchytraeus, то они долж ны
быть четко определены и следует представить обоснование выбора вида.
Enchytraeus crypbcus (Westheide & Graefe 1992)являетсявидом, принадлежащим кодной группес Enchytraeus
luxuriosus. Не было с уверенностью установлено его наличие в полевых условиях, его выделяли из культур зем
ляных червей и компостных куч (Rombke. 2003). Следовательно, его определенные экологические потребности
не известны. Однако недавние лабораторные исследования в различных полевых почвах подтвердили, что этот
вид имеет высокую толерантность по отношению к различающимся показателям почвы, таким как pH и структура
(Jarvschи др. 2005). В последние годыэтот вид часто используется вэкотоксикологических исследованиях в резуль-
18