ГОСТ 33637—2015
параллельных камер с отрицательным контролем (четыре отобранных в начале, четыре в конце по
глощения и четыре в конце элиминации), если не используется растворитель, кроме воды. Если ис
пользуется солюбилизирующий агент для внесения испытуемого вещества в почву, то в дополнение к
параллельным пробам следует включить контроль на растворитель (четыре параллельных камеры
должны быть отобраны в начале, четыре в конце фазы поглощения и четыре в конце фазы элимина
ции). содержащий все компоненты, за исключением испытуемого вещества. В этом случав четыре до
полнительные параллельные камеры с отрицательным контролем (без растворителя) также включают в
испытание для дополнительного отбора проб в конце фазы поглощения. Эти повторности можно
биологически сравнить с контролем на растворитель в целях получения информации о возможном
влиянии растворителя на тестовые организмы. Рекомендуется установить достаточное количество до
полнительных параллельных камер (например, восемь) для опыта и контроля(ей).
7.6 Частота измерений качества почвы
pH почвы, влажность почвы и температуру (постоянно) в испытательной камере измеряют в нача
ле и в конце фаз поглощения и элиминации. Раз в неделю влажность почвы должна контролироваться
взвешиванием испытуемых сосудов и сравнением фактической массы с первоначалыюй массой в на
чале испытания. Потери воды должны компенсироваться добавлением деионизированной воды.
7.7 Отбор проб и анализ червей и почвы
7.7.1 Примеры графиков отбора проб для фаз поглощения и элиминации для земляных червей и
энхитреид в испытаниях по биоаккумуляции приводятся в приложении Б.
7.7.2 Почва отбирается из испытуемых камер для определения концентрации испытуемого веще
ства перед внесением червей и во время фаз поглощения и элиминации. В ходе испытания определяют
концентрацию испытуемого вещества в червях и почве. В общем, измеряются общие концентрации в
почве. Как дополнительный вариант, измеряют концентрации в поровой воде, в этом случав до начала
исследования представляют обоснование и соответствующие методы и включают их в отчет.
7.7.3 Червей и почву отбирают не менее шести раз в течение фаз поглощения и элиминации.
Если стабильность испытуемого вещества подтверждена, то количество анализов почвы может быть
уменьшено. Рекомендуется анализировать не менее трех повторностей в начале и в конце фазы по
глощения. Если измеренная концентрация а почве в конце фазы поглощения отклоняется от исходной
концентрации более чем на 30 %. то также анализируют образцы почвы, отобранные на другие сроки.
7.7.4 Червей из каждой повторности извлекают из почвы во время каждого отбора проб (напри
мер. распределением почвы из каждой повторности в мелком лотке и сбором червей с помощью мягко
го ювелирного пинцета) и быстро промывают водой в мелком стеклянном или стальном лотке. Удаляют
излишки воды (см. 7.1.4). Червей осторожно переносят в предварительно точно взвешенный сосуд и
сразу же взвешивают, включая содержимое кишечника.
7.7.5 Земляным червям (Eisenia sp.) дают возможность освободить кишечник в течение ночи, на
пример, используя чашку Петри, покрытую влажной фильтровальной бумагой (см. 7.1.4). После этого
определяют массу червей для оценки возможного уменьшения биомассы в ходе испытания (см. крите
рии достоверности 5.1). Взвешивание и анализ тканей энхитреид осуществляются без освобождения
кишечника, так как это технически сложно из-за небольшого размера этих червей. После определения
конечной массы червей немедленно умерщвляют с использованием наиболее подходящего метода (на
пример, с помощью жидкого азота или замораживанием при температуре ниже минус 18 °С).
7.7.6 Во время фазы элиминации черви замещают загрязненное содержимое кишечника чистой
почвой. Это означает, что измерения червей без очистки кишечника (энхитреиды в данном контексте),
отобранных непосредственно перед фазой элиминации, включают в себя загрязненную содержимым
кишечника почву. Для водных малощетинковых червей предполагается, что после первых 4— 24 ч фазы
элиминации большинство загрязненного содержимого кишечника было замещено чистым осадком [47].
Подобные результаты были получены для земляных червей в исследованиях по накоплению радио
активного кадмия и цинка [30]. В эихитреидах с неочищенным кишечником концентрация испытуемого
вещества в первой пробе, отобранной в фазе элиминации, может рассматриваться в качестве концен
трации в ткани после очистки кишечника. Для учета разбавления концентрации испытуемого вещества
незагрязненной почвой во время фазы элиминации массу содержимого кишечника можно определить по
соотношению сырая масса червей/ масса зольного остатка червя или сухая масса червя/масса золь ного
остатка червя.
8