ГОСТ Р 56140—2014
П р и м е ч а н и е - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылоч
ных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального
агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному
указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по вы
пускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год Если заменен
ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую
версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стан
дарт. на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с
указан ным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный
стан дарт. на который дана датированная ссыпка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое
дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный
стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссыпка на него, рекомендуется применять в части,
не затра гивающей эту ссыпку.
3 Термины, определения и сокращения
3.1 В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52833. ГОСТ 31719 и ГОСТ 31929. а
также следующие термины с соответствующими определениями.
3.1.1 Гяд-полимераза: Фермент, участвующий в процессе построения цепей нуклеиновых кис
лот из нуклеотидов.
3.1.2 элюция: Процесс вымывания ДНК из твердого носителя (сорбента) с использованием
растворителя.
3.2 В настоящем стандарте применены следующие сокращения:
а) дНТФ - раствор, содержащий нуклеотиды:
1) 2’-дезоксиаденозин-5‘-трифосфорной кислоты тетранатриевую соль;
2) 2’-дезоксицитидин-5’-трифосфорной кислоты тетранатриевую соль:
3) 2’-дезоксигуанин- 5’-трифосфорной кислоты тетранатриевую соль;
4) 2’-дезокситимидин-5’-трифосфорной кислоты тетранатриевую соль;
б) ОКО - контрольный образец этапа экстракции;
в) ПКО - положительный контрольный образец, содержащий ДНК микроорганизмов рода
Mycoplasma:
г) ПЦР - полимеразная цепная реакция;
д) ПЦР-буфер - реакционный буфер для проведения ПЦР;
е) ТБЕ-буфер - трис-боратный буфер;
ж) п. н. - пара нуклеотидов;
и) ЭДТА - этиледиаминтетраацетат.
4 Сущность метода
Сущность метода ПЦР заключается в амплификации специфического участка ДНК микроорга
низмов рода Mycoplasma за счет многократного повторения циклов денатурации ДНК в исследуемой
пробе, отжига специфических олигонуклеотидных праймеров и синтеза комплементарных цепей ДНК с
помощью фермента Гар-полимеразы. Наличие ДНК микроорганизмов рода Mycoplasma в исследу
емой пробе определяют по появлению специфичной полосы амплифицированной ДНК длиной 509 п. н.,
просматриваемой на электрофореграмме.
5 Условия выполнения исследований и требования безопасности
При выполнении исследований следует соблюдать условия и требования безопасности, установ
ленные в ГОСТ Р 52833 и ГОСТ Р 55576-2013 (раздел 4. приложение А).
П р и м е ч а н и е - Работу с микроорганизмами I - IV групп патогенности проводят в соответствии с тре
бованиями (1). [2] и [3J.
6 Средства измерений, оборудование, материалы, реактивы и посуда
6.1 Общие требования - по ГОСТ ИСО/МЭК 17025.
6.2 Для проведения исследований применяют:
- микроцентрифугу-встряхиватель со скоростью вращения до 2000 об/мин;
- холодильник бытовой электрический компрессионный по ГОСТ 26678 с диапазоном темпера
тур от 2 °С до 8 5С и с морозильной камерой с температурой не более минус 16 X ;
- микропробирки одноразовые полипропиленовые вместимостью 0.5 или 0.2 см3и завинчиваю
щиеся или плотно закрывающиеся вместимостью 1,5 см3;
- набор дозаторов электронных или механических лабораторных медицинских по ГОСТ 28311
или переменного объема по ГОСТ Р 52173 (пункт 4.14):
2