ГОСТ 32376—2013
показывают эффективность ответа соответствующего штамма бактерий и системы метаболической
активации.
Длявариантовсиспользованиемсистемыметаболическойактивации,соединение
положительного контроля следует отбирать с учетом типа бактериального штамма.
Таблица 1 - Примеры веществ для положительного контроля в вариантах с метаболической
активацией.
ВеществоCAS №EINECS №
212-308-4
200-359-5
200-028-5
210-330-9
9.10-диметилантрацен
7.12-диметилбенз[а]антрацен
Бензо[а]пирен
2-аминоантрацен
Циклофосфамид
Циклофосфамид моногидрат
781-43-1
57-97-6
50-32-8
613-13-8
50-18-0
6055-19-2
200-015-4
Таблица 2 - Примеры штамм-специфичных соединений для положительного контроля в
вариантах без метаболической активации._________________________________________________
ВеществоCAS №EINECS №Штамм
26628-22-8
607-57-8
90-45-9
17070-45-0
80-15-9
50-07-7
247-852-1
210-138-5
201-995-6
241-129-4
201-254-7
200-008-6
Азид натрия
2-нитрофлуарен
9-аминоакридин
ICR 191
Кумен гидропероксид
Митомицин С
N-3Tnn-N-HHTpo-N-
нитрозогуанидин
70-25-7
200-730-1
4-нитрохинолин-1 -оксид
56-57-5
200-281-1
Фурилфурамид (AF2)
3688-53-7
ТА 1535 и ТА 100
ТА 98
ТА 1537. ТА 97 и ТА 97а
ТА 1537, ТА 97 и ТА 97а
ТА 102
WP2 uvrA и ТА102
WP2. WP2uvrA и
WP2uvrA(pKM101)
VVP2. WP2uvrA и
WP2uvrA(pKM101)
Плазмидосодержащие штаммы
Могут быть использованы для положительного контроля другие адекватные вещества.
Использование других химических соединений, если такие имеются, из класса известных
положительных контролей допустимо.
Должны быть включены отрицательные комтроли с растворителем/средой без исследуемого
вещества при введении тем же способом, что и экспериментальные варианты. К тому же
отрицательные контроли при сравнении с контролем, полученным в предыдущих экспериментах,
могут показать, что побочные или мутагенные эффекты не индуцированы выбранным растворителем.
4.3 Процедура тестирования
В методе введения вещества на чашку в варианте без метаболической активации обычно 0.05
мл или 0.1 мл раствора исследуемого вещества. 0.1 мл свежей бактериальной культуры
(содержащей, приблизительно. 10вжизнеспособных клеток) и 0,5 мл стерильного буферного раствора
смешивается с 2.0 мл верхнего агара. В варианте с метаболической активацией обычно 0,5
мл микросомальной активирующей смеси, содержащей адекватное количество
постмитохондриальной фракции [в диапазоне от 5 % до30 % (объем) общей
микросомальной активирующей смеси) смешивается с верхним агаром (2,0 мл) вместе с
бактериями и раствором исследуемого вещества. Содержимое каждой пробирки смешивается и
выливается на чашку на поверхность минимального агара. Верхнему агару нужно дать затвердеть
перед инкубацией.
В преинкубациониом тесте раствор вещества предварительно инкубируют с опытным штаммом
бактерий (содержащим, приблизительно, 10^ жизнеспособных клеток) и стерильным буфером или
микросомальной активирующей смесью (0,5 мл). Обычно смесь инкубируют в течение 20 мин или
более при 30-37 С перед смешиванием с верхним агаром и выливанием на поверхность
минимального агара. Обычно, 0,05 или 0,1 мл раствора испытуемого вещества. 0.1 мл бактерий, и 0,5 мл
смеси S9 или стерильного буферного раствора смешивается с 2,0 мл верхнего агара. Пробирки
должны быть аэрированы во время преинкубации с помощью аппарата для встряхивания.
Для адекватной оценки изменчивости следует использовать для каждого уровня доз 3 чашки.
Использование 2 чашек возможно, если научно обосновано. Случайная потеря чашки не обязательно
делает опыт недействительным.
Газообразные или летучие вещества должны быть испытаны подходящими методами,
например, в закрытом сосуде.
4.4 Инкубация
4