ГОСТ 32634-2014
0.3 - 1 мг/мл) и выдерживают при необходимой температуре в течение 3 часов. Осажденный синий
формазан затем экстрагируют с помощью растворителя (изопропанола), а концентрацию формазака
измеряют путем определения оптической плотности при длине волны от 540 до 595 нм.
Химическое действие исследуемого вещества на витальные красители может имитировать
действие клеточного метаболизма, что приводит к ложной оценке жизнеспособности. Было показано,
что это происходит в случае неполного удаления исследуемого вещества с образца кожи [10). Если
исследуемое вещество непосредственно воздействует на витальный краситель, для обнаружения и
корректировки вмешательства исследуемого вещества в оценку жизнеспособности клеток должны
быть использованы дополнительные контрольные процедуры [10, 24].
5 Интерпретация результатов
Значения оптической плотности, полученные для каждого образца, могут быть использованы
для расчета процента жизнеспособности по сравнению с отрицательным контрольным значением,
которое произвольно устанавливается на уровне 100 %.
Пороговоезначениежизнеспособностиклетоквпроцентах,позволяющееотличить
коррозионные вещества (или различные классы коррозионных веществ) или статистические
процедуры, используемые для оценки результатов и выявления коррозионных веществ должны быть
четко определены и задокументированы. Пороговые значения и статистические процедуры должны
быть приемлемыми. Как правило, данные пороговые значения устанавливаются во время
оптимизации, проверяются на стадии превалидации и подтверждаются в валидационном
исследовании. Например, прогнозирование разъедающим/корроэионного потенциала на модели
EpiDerm™ [10]:
Исследуемое вещество признается коррозионным для кожи, если:
- жизнеспособность после 3 минут воздействия составляет менее 50 % или
- жизнеспособность после 3 минут воздействия больше или равна 50 % и жизнеспособность
после 1часа воздействия составляет менее 15%.
Исследуемое вещество признается некоррозионным для кожи, если:
- жизнеспособность после 3 минут воздействия больше или равна 50 % и жизнеспособность
после 1часа воздействия больше или равна 15%.
6 Данные и отчет о проведении испытания
6.1 Данные
Длякаждого образца ткани значения оптической плотностии расчетный процент
жизнеспособностиклетокпослевоздействияисследуемоговещества,положительныеи
отрицательные контрольные значения должны быть представлены в табличной форме, при
необходимости, с указанием данных для параллельных испытаний, средних и индивидуальных
величин.
6.2 Отчет
Отчет о проведении испытания должен содержать следующую информацию:
Исследуемое и контрольное вещества:
- химические наименования, например. IUPAC или CAS, и номер CAS, если он известен;
- чистота и состав вещества или смеси (в процентах по весу);
- физико-химическиесвойства,такиекак физическоесостояние.pH,стабильность,
растворимость в воде, имеющие отношение к проведению исследования:
- при необходимости, предварительная подготовка исследуемого / контрольного веществ
(например, нагревание, измельчение);
- стабильность, если известно.
Обоснование использования модели кожи и протокола испытания.
Условия проведения испытания:
- используемая клеточная система;
- информация о калибровке прибора, используемого для измерения жизнеспособности клеток
(например, спектрофотометра);
- полнаясопутствующаяинформация обиспользуемоймоделикожи,включаяее
достоверность;
- сведения об используемых процедурах испытаний;
- используемые дозы исследуемого вещества;
- описание любых изменений процедур испытаний;
3