ГОСТ 32628-2014
Количество корма, необходимое до начала теста, должно обеспечивать адекватную выживаемость.
Экстракт корма для рыб может быть получен путем кипячения суспензии корма для рыб с
последующим удалением крупных частиц, например путем фильтрации или удаления осажденной
фракции. Содержание общего органического углерода в полученном экстракте, как правило,
составляет около 3.7 r/л, только малое количество которого будет добавлено в тестовые сосуды.
8.1.3Личинки могут удерживаться на поверхности воды без возможности проникновения в
толщу воды. Это во многом зависит от физико-химических свойств исследуемого вещества и (или)
тестовой среды, а также может быть связано с процессом очистки сосудов. Добавление личинок к
тестовой системе путем выпуска их ниже поверхности раствора является одним из способов
уменьшения эффекта задержания на поверхности. При наличии личинок на поверхности
тестируемого раствора на них можно добавить несколько капель раствора из пипетки, что поможет им
погрузиться в раствор. Задержание личинок на поверхности может привести к получению
недостоверных данных (например высокой смертности в контрольных пробах). Одним из возможных
решений для предотвращения задержания является добавление небольшого количества
диспергатора, например Твин-80 в концентрации 2 мкл/л. для снижения поверхностного натяжения
тестируемого раствора, хотя использование диспергаторов, как правило, не приветствуется (см. п.
7.4.1). Другим способом может быть физическое предотвращение поступления личинок на границу
раздела воздух/раствор. например за счет использования герметичных тестовых сосудов без
свободного воздушного пространства или с помощью сеток, удерживающих личинок в тестируемом
растворе.
8.2 Условия проведения теста
8.2.1 Тестовые и контрольные группы
Тестовые сосуды заполняют необходимым количеством тестируемых растворов. Личинок
первого возраста Chironomus sp. случайным образом распределяют в тестовые сосуды при помощи
пипетки с тупым концом. Для каждой тестируемой концентрации и контрольной пробы используют, как
минимум, по 20 личинок, предварительно разделенных на четыре группы по пять личинок. Для
каждой личинки необходимо обеспечить хотя бы по 2 мл тестируемого раствора (т.е. объем
тестируемого раствора для пяти личинок в тестовом сосуде должен составлять, как минимум, 10 мл;
объем тестируемого раствора также должен быть достаточным для отбора необходимых образцов в
конце теста для аналитического определения концентрации воздействия).
8.2.2 Тестируемые концентрации
8.2.2.1 Концентрации для окончательного тестирования можно определять в тесте по подбору
диапазона концентраций. Для этого на личинок воздействуют исследуемым веществом в широком
диапазоне концентраций в течение 48 ч. Для каждой выбранной концентрации используют, как
минимум, десять личинок, разделенных на две параллельные группы.
8.2.2.2 В окончательном тесте используют, как минимум, пять концентраций исследуемого
вещества, а также контрольные пробы только с водой и растворителем (при необходимости).
Контрольная проба с растворителем содержит растворитель в концентрации, используемой при
тестировании. Тестируемые концентрации должны составлять геометрическую прогрессию со
знаменателем не более 2,2. В отчете о проведении теста необходимо обоснование использования в
тестировании менее пяти концентраций или наличия геометрической прогрессии с большим
знаменателем, например пологий наклон кривой «тестируемая концентрация - отклик». Желательно,
чтобы наибольшая тестируемая концентрация вызывала 100%-ую иммобилизацию, а наименьшая
концентрация не приводила к появлению какого-либо очевидного эффекта. В то же время, данные
условия являются второстепенными для надлежащего определения ЕСМ.
8.2.3 Условия инкубации
Температура воды должна быть 18 - 22 °С для С. riparius. Для С. ditutus и С. yoshimatsui
рекомендуется температура 23 еС и 25 °С. соответственно. В каждом отдельном тесте температура
должна быть постоянной в пределах ±1 °С. Рекомендуется освещенность в последовательности - 16
ч свет. 8 ч темнота, интенсивность света должна быть в пределах от 500 до 1000 лк. Полная темнота
также приемлема, особенно для тестирования веществ, неустойчивых на свету. Тестовые сосуды
должны быть расположены в лаборатории в случайном порядке.
8.2.4 Продолжительность теста
Тестирование начинается с добавления личинок в тестируемый раствор и продолжается в
течение 48 ч.
8.2.5 Наблюдения
На 24-ый и 48-ой ч тестирования каждый тестовый сосуд необходимо проверять на присутствие
иммобилизованныхличинок.Дляоблегчениянаблюденийнеобходимоиспользовать
стереомикроскоп или световой стол. Личинки, неспособные изменять свое положение (ползком или за
счет плавательных движений) в течение 15 секунд после воздействия механического раздражителя,
5