ГОСТ 32628-2014
При первом появлении взрослых особей в инкубаторе все сосуды для культивирования следует
проверять три раза в неделю на наличие кладок яиц. При необходимости для начала теста на острую
токсичность или для создания новой культуры кладки яиц извлекают из сосудов для культивирования и
переносят в небольшие емкости, заполненные водой для культивирования. Кладки яиц могут
использоваться непосредственно для выращивания новой культуры (например 2 - 4 кладки яиц на
один сосуд для культивирования) или после вылулливания личинок (например 200 личинок)
переносят в новый сосуд для культивирования.
При температуре 20 °С личинки первого возраста появляются через 2 -3 дня.
В.7 Подготовка новых сосудов для культивирования
После получения новой культуры должна быть возможность установки новых сосудов для
культивирования. Новые сосуды устанавливают один раз в неделю или реже в зависимости от
условий тестирования и
удаления старых сосудов после появления взрослых хирономид. Данная
процедура позволяет регулярно получать взрослых хирономид при минимальном контроле
культивирования.
В.8 Подготовка сред для культивирования М4 и М7
Среды для культивирования М4 и М7 готовят из основных растворов (I) микроэлементов и
витаминов. Сначала готовят основные растворы (I) в деионизированной воде.
Из данных основных
растворов (I) готовят второй единственный основной комбинированный раствор (II) (таблица В.1).
Концентрации отдельных химических веществ в среде М7 в 4 раза ниже, чем в среде М4.
В.9 Подготовка среды М7
Каждый основной раствор (I) готовят индивидуально, и комбинированный основной раствор (II)
получают из приготовленных основных растворов (I). Для приготовления среды М7 50 мл
комбинированного основного раствора (II) и определенные объемы основных растворов питательных
веществ, указанные в таблице В.2. доводят до метки 1 л деионизированной водой. Основной раствор
витаминов получают путем
добавления трех витаминов к деионизированной воде, как показано в
таблице В.З, и 0.1 мл основного комбинированного раствора витаминов добавляют в подготовленную
среду М7 незадолго до использования. Основной раствор витаминов хранят в замороженном виде
небольшими порциями. Подготовленные среды аэрируют и отстаивают.
Таблица В.1 - Основные растворы микроэлементов для сред М4 и М7
мга
Объем основного
Основные растворы (I)
Масса вещества.
раствора (I).
мл/л4
Окончательные
концентрации в
тестируемых растворах
(мг/л)
М7М4
М7
4
Н3ВОа
MgCI24H20 ’
UCI 1
RbCI ’
SrCI26Н20 ’
NaBr 1
Na2Mo042Н20 ’
C
u
CU-2H20 ’
ZnCI2
СоС126Н20
Kl
Na2Se03
n h v o
3
№2ЭДТА 2Н20 ’■
М4
571901.0
7210 1.0
6120 1.0
1420 1.0
3040 1.0
320 1.0
1260 1.0
335 1.0
260 1.0
200 1,0
65 1.0
43.8 1,0
11..5 1.0
500020.0
FeS047H20
199120.0
0.25 2.860
0.25 0.361
0.25 0.306
0,25 0.071
0,25 0.152
0.25 0.016
0,25 0.063
0.25 0.017
1.0 0.013
1.0 0.010
1.00.0033
1,00.0022
1.0 0.00058
5,0 2.5
5.01.0
0.715
0.090
0.770
0.018
0.038
0.004
0.016
0.004
0.013
0.010
0.0033
0.0022
0.00058
0.625
0.249
- Содержание данных веществ различнодля сред М4 и М7.
J - Данные растворы готовят индивидуально, сливают вместе и немедленно помещают в автоклав.
л- Доводят до метки 1л деионизированной водой для приготовления основного раствора (I).
1- Доводят до метки 1л деионизированной водой для приготовления комбинированного основного раствора III).
10