ГОСТ 32628-2014
акклиматизации - размещение кладок яиц для выведения и сохранения личинок первого возраста в
среде, используемой для тестирования, при температуре тестирования до начала тестирования.
7.3 Вода
7.3.1 Для содержания личинок и проведения тестирования может использоваться природная
вода(поверхностныеили подземныеводы), дехлорированнаяводопроводнаяводаили
искусственная среда (М4 или М7. приложение В), если Chironomus sp. выживают в таких средах во
время культивирования, акклиматизации и тестирования, не проявляя признаков стресса. Любая
вода, качество которой соответствует химическим характеристикам подходящей воды, указанным в
приложении С. может использоваться для тестирования. Качество воды должно быть постоянным в
течение всего теста. Искусственные среды могут быть получены путем добавления определенного
количества реагентов (ч.д.а.) к дистиллированной или деионизированной воде. Примеры
приготовления искусственных сред приведены в приложении В.
7.3.2 Характеристики качества природной воды, указанные в приложении С, необходимо
измерять как минимум два раза в год. или если предполагается, что качество воды могло измениться.
Также необходимо определять содержание тяжелых металлов (например Си. Pb. Zn. Hg, Cd. Ni). При
использовании дехлорированной водопроводной воды необходимо определять содержание хлора.
При использовании природной воды необходимо измерять электрическую проводимость, содержание
общего органического углерода (ООУ) и химического потребления кислорода (ХПК).
7.3.4 Для тестирования и культивирования рекомендуется использовать одну и ту же воду. Это
позволит избежать проведения акклиматизации. Перед тестированием необходимо провести
аэрацию воды для насыщения кислородом.
7.4 Тестируемые растворы
7.4.1 Тестируемые растворы исследуемого вещества необходимой концентрации обычно
готовят путем разбавления исходного основного раствора. Желательно готовить основные растворы
путем растворения исследуемого вещества непосредственно в используемой воде. Если возможно, то
использования растворителей и диспергаторов следует избегать. Тем не менее, применение
растворителей может быть необходимо в некоторых случаях для получения раствора с нужной
концентрацией или однородного основного раствора. Для активных ингредиентов или других
индивидуальных химических веществ (т.е. не смесей) количество исследуемого вещества в
тестируемом растворе не должно превышать практического предела растворимости исследуемого
вощества в воде (среде). При использовании растворителей или диспергаторов концентрация
растворителя должна быть одинаковой во всех тестируемых растворах и контрольной пробе. Кроме
того, максимальная концентрация растворителя должна составлять 100 мкл/л или 100 мг/л в
зависимости от того, какая величина меньше.
7.4.2 В общем случае, тестирование проводится без корректировки pH. Если pH не сохраняется
в диапазоне 6 - 9. то проводится повторное тестирование с регулировкой pH исходного основного
раствора до pH используемой воды перед приготовлением тестируемых растворов. Регулирование
pH, предпочтительно 0.1 М раствором HCI и 0,1 М раствором NaOH, должно проводиться таким
образом, чтобы концентрация исходного основного раствора не изменялась в значительной степени и
не происходили какие-либо химические реакции, например осаждение исследуемого вещества. Для
поддержания концентрации тестируемого раствора в течение 48 ч корректировка pH в диапазоне 6 -9
может проводиться для химических веществ, неустойчивых в данном диапазоне pH.
8 Процедура теста
8.1 Предварительная подготовка тестовых организмов
8.1.1 За 4 - 5 дней до добавления личинок первого возраста в тестовые сосуды (начала теста)
свежие кладки яиц (< 24 ч) отбираются из основной культуры. Для обеспечения правильного возраста
кладок края сосудов для культивирования должны быть очищены от старых кладок яиц за 24 ч до
отбора (старые кладки также могут оставаться в сосудах для культивирования). Для начала
тестирования как минимум 3, но наиболее предпочтительно б, нитей яиц отбирают из культуры, и
дают им вылупиться, одновременно добавляя корм (п. 8.1.2). Личинки для тестирования выбираются
случайным образом из этой партии.
При тестировании может использоваться среда, полученная от культивирования, или
свежеприготовленная среда. Как правило, личинки вылупляются в течение нескольких дней после
закладки яиц (от 2 до 3 дней для С. riparius при 20 °С и от 1 до 4 дней для С. dilutus при 23 ®С и С.
yoshimatsui при 25 еС). Для тестирования необходимо использовать личинки первого возраста.
Возраст личинок может быть проверен путем измерения ширины головной капсулы. На рисунках 1 и 2
изображены свежая кладка яиц и кладка яиц после вылупливания соответственно.
3