ГОСТ 32628-2014
Приложение В
(рекомендуемое)
Культивирование
Chironomus riparius
В.1 Культивирование личинок С. riparius может проводиться в чашке-кристаллизаторе или
больших сосудах. На дно сосуда тонким слоем от 5 до 10 мм помещают мелкий кварцевый песок.
Диатомовая земля (например Merck, ст 8117) также является подходящим субстратом для
культивирования (достаточно тонкого слоя диатомовой земли высотой до нескольких мм). Также в
качестве субстрата может использоваться фильтровальная бумага. После добавления субстрата в
сосуд для культивирования добавляют воду (п. В.З) на высоту до нескольких сантиметров. По мере
необходимости в сосуд для культивирования добавляют воду для восполнения потерь вследствие
испарения и предотвращения высыхания среды для культивирования. При необходимости воду
можно периодически заменять.
Проводят аккуратную аэрацию подготовленной среды для культивирования. Сосуды для
культивирования помещают в специальный инкубатор для предотвращения выпуска появившихся
взрослых хирономид. Инкубатор должен быть достаточной вместимости для обеспечения свободного
перемещения и роения появившихся взрослых хирономид. иначе не будет происходить копуляция
(размеры инкубатора должны составлять как минимум 30 * 30 * 30 см).
Для минимизации инбридинга желательно регулярно проводить обмен полученными нитями яиц
с другими лабораториями.
В.2 В инкубаторе необходимо поддерживать комнатную температуру или постоянную
температуру 20 ± 2 °С и обеспечивать освещенность в последовательности: 16 ч свет (интенсивность
около 1000 лк). 8 ч темнота, включая получасовую фазу рассвета или сумерек с низкой
интенсивностью света около 500 лк для стимулирования роения и воспроизводства. Влажность
воздуха должна составлять более 60%, меньшая влажность воздуха может препятствовать
размножению.
В.З Вода для культивирования
В качестве воды для культивирования может использоваться любая подходящая природная
вода или искусственная среда. Обычно это артезианская вода, дехлорированная водопроводная
вода и искусственные среды (среды М4 или М7). За 24 ч до культивирования следует провести
аэрацию воды. При необходимости воду для культивирования можно обновлять путем
аккуратного сливания или откачивания использованной воды из сосуда для культивирования без
воздействия на личинок. Замена воды должна проводиться, как минимум, один раз в месяц или
при значительном ухудшении качества воды.
В.4 Кормление личинок
В.4.1 В качестве корма для личинок используют хлопьевидный корм для рыб (TetraMin®,
TetraPhyll® или другой аналогичный корм) в количестве около 250 мг на один сосуд для
культивирования в сутки. Корм дают личинкам в виде сухого порошка или водной суспензии: 1.0 г
хлопьевидного корма добавляют к 20 мл воды для культивирования и перемешивают до получения
однородной смеси. В сосуды для культивирования добавляют суспензию из расчета 5 мл на один
сосуд (перед добавлением в сосуд суспензию встряхивают). Для личинок старшего возраста корма
может быть больше.
В.4.2 Кормление регулируется в зависимости от качества воды. Если среда для
культивирования становится мутной, то количество корма необходимо уменьшать. Добавление корма
необходимо тщательно контролировать. Недостаточное питание может привести к миграции личинок
на дно сосуда, слишком обильное питание может вызывать повышение активности микроорганизмов
и снижение концентрации кислорода. Обе ситуации могут привести к снижению темпов роста личинок.
В.4.3 В сосуды для культивирования также можно добавлять некоторые виды зеленых
водорослей (например Scencdesmus subspicatus. Chlorella vulgaris).
BAA Кормление взрослых хирономид
В качестве корма для взрослых хирономид используют насыщенный раствор сахарозы,
нанесенный на ватный диск. Такое кормление способствует увеличению продолжительности жизни
хирономид и улучшению воспроизводства.
В.5 Появление хирономид
По прошествии 1 3 - 1 5 дней при температуре 20 ± 2 °С в сосудах для культивирования
появляются взрослые особи хирономид. Мужские особи имеют тонкое тело и перистые усики.
В.6 Откладывание яиц
9