ГОСТ 32916—2014
7.2.2Для построения градуировочного графика готовят не менее четырех рабочих растворов
витамина D3вдиапазоне концентраций 0,1— 10,0 мкг/см3.
Для этого 1.0 и 10.0 см3рабочего раствора витамина D-. (7.2.1) помещают вмерную колбу вмести
мостью 100 см3 и растворы доводят до метки этиловым абсолютированным спиртом. Массовая кон
центрация полученных растворов витамина D, составляетсоответственно 0,1 и 1.0 мкг/см3.
Также 0,5 и 1,0см3исходногораствора витамина D3(7.1) помещаютвмерные колбы вместимостью
100 см3и растворы доводят до метки этиловым абсолютированным спиртом. Массовая концентрация
полученных растворов витамина D3составляет 5,0 и 10,0 мкг/см3.
7.3 Подготовка проб
7.3.1 Для омыления анализируемой пробы, содержащей менее 30 %жира. 20 гисследуемого про дукта,
взвешенного с отсчетом показаний до 0,001 г, помещают в круглодонную колбу вместимостью 100—
250 см3, добавляют 25 см3 раствора гидроокиси калия молярной концентрации 5 моль/дм3, 1 г
аскорбиновой кислоты (или другого антиокислителя) и25см3изопропилового спирта. Колбусоединяют с
обратным холодильником и проводят омыление при температуре 70 °С—80 вС в течение 30 мин. По
окончании указанного времени колбу охлаждают до комнатной температуры и отделяют верхний изо
пропиловый слой. Измеряютегообъем (V). отбираютот него 10 см3
(V2)
иразбавляют дистиллированной
водой всоотношении 1:1
(VIV).
Вотобранном объеме раствора концентрируют витамин D, используя картридждля твердофазной
экстракции (ТФЭ) и вакуумную установку для проведения ТФЭ. Картридж устанавливают в вакуумную
камеру для ТФЭ и проводят предварительную его промывку раствором изопропилового спирта массо
вой долей 50 %. Затем через картридж пропускают полученный разбавленный раствор. После чего
картридж осушают впотоке воздуха ипроводят элюирование витамина D изопропиловым спиртом объе
мом 2 см3. Измеряют объем полученного элюата (V,) и используют его для дальнейшего анализа мето
дом ОФ ВЭЖХ.
7.3.2 Для омыления анализируемой пробы, содержащей более 30 % жира, 10— 15 г исследуемого
образца, взвешенного с отсчетом показаний до 0,001 г. помещают вкруглодонную колбу вместимостью
250—500 см3идалее, как описано в 7.3.1.
7.4 Подготовка хроматографа
7.4.1 Установку, включениеиподготовку хроматографа к работе выполняютвсоответствии с руко
водством по эксплуатации прибора. Перед началом работы колонки промывают ацетонитрилом.
Хроматографические условия оптимизируют для оптимального разделения пика витамина D от
пиков токоферолов идругихсоединений.
Раствор витамина D3массовой концентрацией 1 мкг/см3(7.2.2) несколько раз вводят в хроматог
рафдля аналитической ОФ ВЭЖХ ипроверяют повторяемость полного выделения пика витамина D3.
7.4.2 Условияхроматографирования:
- температура колонки — (23 х 2) °С;
- скорость подачи подвижной фазы — 0,7—1,0 см3/мин;
- объем вводимой пробы для аналитической ОФ ВЭЖХ — 20 мкл;
- подвижная фаза для аналитической ОФ ВЭЖХ — ацетонитрил.
7.5 Построение градуировочной зависимости
Процедуры построенияградуировочнойзависимости выполняются всоответствии с руководством
поэксплуатации оборудования ируководством попрограммномуобеспечению.
Проводят хроматографический анализ не менее четырех рабочих растворов витамина D3. приго
товленных по 7.2.2.
Градуировку проводят нереже одного раза вмесяц, атакже приизменении условий хроматографи
ческого анализа, при смене колонки, при замене реактивов, при несоответствии результатов метрологи
ческим требованиям.
8 Условия проведения измерений
При выполнении измерений влаборатории следует соблюдать следующиеусловия:
- температура окружающего воздуха................................(20 ± 5) ’"С;
- относительная влажность воздуха................................(65 ± 15) %;
- атмосферное давление.....................................................(96
1
10) кПа;
- частота переменного тока..................................................(50 ± 5) Гц;
- напряжение в се ти ..............................................................(220
х
10) В.
4