ГОСТ 31343—2007
В пробы добавляют 1см3сульфата марганца и 1см3реактива Винклера, погружая каждый раз кончик пипетки
или бюретки в пробу, быстро закрывают пробкой без пузырьков воздуха и тщательно перемешивают, при добавле
нии реактивов выливаются 2 см3жидкости испытуемой пробы, которые потом учитываются при расчете.
Образовавшемуся осадку гидроокиси марганца дают отстояться не менее 10 мин и растворяют а 2 см3 H2S 0 4
(2:3). закрывают пробкой и тщательно перемешивают, вылитая жидкость не учитывается.
В колбу для титрования переносят содержимое склянки или отбирают 100 см3и титруют раствором 0.1 н. тио
сульфата натрия до светло-желтой окраски, затем прибавляют крахмал и продолжают титровать до исчезновения
синей окраски.
Биохимическую потребность кислорода ХБПК. мг/дм30 2. вычисляют по формуле
Г
,
v„О Ь -Ц вХ И И М О О О
(Е.1)
ВПК
V11
где V3 — объем тиосульфата натрия, пошедшего на титрование пробы в «нулевой день», см3;
V1D— объем тиосульфата натрия, пошедшего на титрование пробы в пятый день, см3;
К, — поправочный коэффициент тиосульфата натрия;
8000 — молярная масса 1/2 0 2, мг/дм3:
VtJ — объем пробы, взятый для анализа с расчетом всех разбавлений, см3.
Приложение Ж
(рекомендуемое)
Метод бактериологического исследования навоза
Пробу объемом 50— 100 см3 тщательно перемешивают, после чего стерильной пипеткой отбирают 1 см3сточ
ной жидкости и готовят необходимое для посева разведение: в пробирку с9см3стерильной водопроводной воды вно
сят 1см3 исследуемой сточной жидкости и после тщательного перемешивания переносят в последующие пробирки с
9 см3 стерильной воды по 1 см3 предыдущего разведения. Для определения общего числа бактерий рекомендуется
делать посев из 10*5.10-6. 10-7 разведения, 1см3жидкости выбранного разведения вносят встерильную чашку
Петри и заливают остуженным до 45 ‘С полуторапроцентным мясопептонным агаром. Осторожно покачивая чашки,
пере мешивают содержимое и после застывания агара перевернутые чашки помещают в термостат. На крышки
чашек наносят надпись с указанием номера или названия пробы, разведения и даты посева. Посевы инкубируют 24 ч
при температуре (37.01 0.5)®С. Учет выросших колоний проводят с помощью лупы 4—5-кратного увеличения.
Подсчету подлежат все выросшие по чашкам колонии как в глубине,так и на поверхности среды. Путем последующего
пересче та. учитывая разведения, определяют количество микроорганизмов в 1см3 исследуемой пробы.
Определение коли-титра проводят следующим образом:
Метод основан на способности бактерий кишечной палочки восстановить бесцветный раствор трифенилтет-
разолхлорида (ТТХ) в устойчивое соединение трифенилформазана. который плохо растворим в воде, выпадает в
виде осадка и придает питательной среде интенсивный красный цвет. Эффективность указанной среды заключает ся
в том. что кишечная палочка довольно устойчива к влиянию формазана, в то время как развитие сопутствующей
микрофлоры не тормозится.
Приготовление индикатора.
К 100 см3стерильной дистиллированной воды добавляют 2 г трифенилтетразолхлорида. Раствор чувствите
лен ксвету и должен храниться в темноте или в темной таре.
Приготовление питательной среды.
К 100 см3мясопептонного бульона добавляют0.5 дм3лактозы и после тщательного перемешивания устанав
ливают pH 6.2—6.4. Питательную среду разливают в пробирки и стерилизуют в автоклаве при давлении 0.5 атм в
течение 20 мин. Перед посевом в каждую пробирку добавляют 2 %-ный раствор трифенилтетразолхлорида из рас
чета 0.3 см3на 9 см3среды.
1 см3 исследуемого разведения вносят в пробирку с питательной средой. Посевы выращивают в термостате
при температуре 43 °С. Отсутствие через 18—20ч инкубации газообразования и изменения цвета питательной сре
ды дает окончательный отрицательный ответ в отношении бактерий группы кишечной палочки. При изменении
цве та среды от желтоватого до интенсивного розового проводят подтверждающий высев на
твердую дифференциальную среду Эндо. Чашки спосевом помещают в термостат на 24 ч при температуре 37 °С.
Из типично окрашенных и белых колоний делают мазки и окрашивают по Грамму. Наличие в мазках
граммотрицательных, коротких, непосредственных палочек подтверждает положительный ответ на присутствие
микробов группы кишеч ной палочки. Результаты исследований выражают коли-титром и коли-индексом
1000
Копи-индекс = коли.титр -<Ж 1 >
24