ГОСТ Р 55569—2013
указанные нормативы, заново градуируют систему.
7 Проведение испытаний
7.1 Схемы испытаний
Испытания проводят в соответствии с выбранной схемой:
- схема испытаний 1 предназначена для опредепения аланина, аргинина, лизина, валина, ги
стидина. глицина, тирозина, лейцина и изолейцина (в сумме), метионина, пролина. серина, треонина,
фенилаланина;
- схема испытаний 2 предназначена для определения аспарагина, глутамина, цистина.
П р и м е ч а н и я
1 В процессе подготовки проб аспарагин и глутамин количественно гидролизуются до аспарагиновой и
глутаминовой кислот соответственно, данные по содержанию аспарагиновой и глутаминовой кислот представ
ляют собой суммарное содержание этих кислот и соответствующих амидов.
2 Цистин (Cys-Cys) является устойчивой формой протеиногенной аминокислоты цистеина (Cys). Цистин в
условиях проведения измерений предварительно окисляют до цистеиновой кислоты, устойчивой к кислотному
гидролизу.
7.2 Проведение гидролиза проб
Для определения аминокислот по схеме испытаний 1 анализируемую пробу массой (0,100 ±
0.001) г помещают в виалу для гидролиза (см. 5.2.7). добавляют 10.0 см3соляной кислоты (см. 6.4.8).
Виалу для гидролиза герметично закрывают завинчивающейся крышкой и перемешивают.
Для определения аминокислот по схеме испытаний 2 анализируемую пробу массой (0,100 ±
0,001) г помещают в кварцевую или фарфоровую чашку (см. 5.2.11), добавляют 5,0 см3 свежеприго
товленной окислительной смеси по 6.4.11 и выпаривают при постоянном перемешивании в струе теп
лого воздуха при температуре 60 °С досуха. Сухой остаток количественно переносят в виалу для гид
ролиза (см. 5.2.7), используя 10,0 см3 соляной кислоты (см. 6.4.8). Виалу для гидролиза герметично
закрывают завинчивающейся крышкой и перемешивают.
Виалы для гидролиза устанавливают в сушильный шкаф (см. 5.2.3). Гидролиз проводят при
температуре 110 "С в течение 14-16 ч.
По окончании гидролиза виалы для гидролиза вынимают из шкафа и охлаждают до комнатной
температуры. Содержимое виал для гидролиза после охлаждения фильтруют через фильтры «синяя
лента» (см. 5.2.16), отбросив первые порции и собирая фильтраты в посуду с крышками во избежание
испарения. Далее переходят к получению ФТК-производных по 7.3.
7.3 Получение ФТК-производных аминокислот
В стеклянные бюксы (см. 5.2.10) вместимостью 10-15 см3отбирают по 0,05 см3подготовленных
гидролизатов. Растворы выпаривают досуха в струе
теплого воздуха. В каждый бюкс с сухими остатками добавляют 0,15 см’’ раствора углекислого
натрия (см. 6.4.9) и 0.3 см3 раствора ФИТЦ (см. 6.4.10). Тщательно перемешивают до растворения
осадка, закрывают крышкой и оставляют на35 мин при комнатной температуре. Затем раство
ры выпаривают досуха в струе теплого воздуха.
Необходимо строго соблюдать последовательность добавляемых растворов при получении
ФТК-производных аминокислот.
Сухие остатки растворяют в 0,5 см3дистиллированной воды (см. 5.3.1) и используют для ана
лиза в течение рабочего дня.
Срок хранения сухих остатков в закрытых бюксах - не более 3 дней.
7.4 Проведение измерений
Подготовленные по 7.3 растворы переносят в пробирки типа Эппендорф (см. 5.2.6), центрифу
гируют (см. 5.2.2) в течение 5 мин при скорости вращения 5000 об/мин.
Капилляр готовят к работе в соответствии с 6.4.2. 6.4.3.
Для каждого подготовленного раствора регистрируют не менее двух электрофореграмм в усло
виях. указанных в таблице 2 для соответствующей схемы испытаний (см. 6.7.2). По окончании реги
страции проверяют правильность автоматической разметки пиков. Используя программное обеспече-
10