ГОСТ ISO 10727—2013
Регулируя концентрацию метанола, можно изменять время удерживания кофеина с целью
оптимизации хроматографического разделения. Той же цели можно достигнуть путем увеличения
температуры колонки, но не выше 60 5С.
4.4 Этанол. 25 % (об.) водный раствор.
4.5 Магния оксид (так называемый «тяжелый оксид магния»).
П р и м е ч а н и е — Использование легкого оксида магния может привести к ошибкам в определении
кофеина.
4.6 Кофеин, исходный раствор массовой концентрации 500 мкг/см3.
Взвешивают 0,125 г кофеина с точностью ± 0.001 г в мерную колбу вместимостью 250 см3.
Добавляют достаточное количество водного раствора этанола (см. 4.4) - примерно до половины
объема колбы. Перемешивают до полного растворения кофеина и добавляют водный раствор этанола до
метки.
Раствор можно использовать в течение месяца при хранении в холодильнике.
4.7 Кофеин, стандартные растворы.
Стандартные растворы кофеина А. В. С и D готовят в день использования.
4.7.1 Кофеин, стандартный раствор А массовой концентрации 15 мкг/см3.
Используют исходный раствор (см. 4.6). имеющий комнатную температуру. С помощью пипетки
помещают 3,0 см3 этого раствора в мерную колбу объемом 100 см3. Добавляют дистиллированную
воду до метки и перемешивают.
4.7.2 Кофеин, стандартный раствор В массовой концентрации 10 мкг/см3.
Следуют процедуре, приведенной в 4.7.1. но отбирают пипеткой 2,0 см3 исходного раствора
кофеина (см. 4.6).
4.7.3 Кофеин, стандартный раствор С массовой концентрации 5 мкг/см3.
Следуют процедуре, приведенной в 4.7.1, но отбирают пипеткой 1,0 см3 исходного раствора
кофеина (см. 4.6).
4.7.4 Кофеин, стандартный раствор D массовой концентрации 2 мкг/см3.
С помощью пипетки переносят 20 см3 стандартного раствора кофеина В (см. 4.7.2) в мерную
колбу объемом 100 см3. Добавляют дистиллированную воду до метки и перемешивают.
5 Оборудование
Используется обычное лабораторное оборудование, в частности:
5.1Высокоэффективный жидкостной хроматограф, оборудованныйУФ детектором, позволяющим
проводитьизмерениявдиапазонедлин волн от254до280 нм, исистемойсбораданныхили самописцем.
П р и м е ч а н и е — Предпочтительным является измерение на длине волны, близкой к 280 нм. т. к.
максимум поглощения кофеина наблюдается на длине волны 272 нм.
Если наблюдается заметное суточное изменение температуры, должны быть предприняты меры
для поддержания постоянной температуры колонки, например с помощью термостата колонки или
водяного охлаждения.
5.2Хроматографическая колонка для ВЭЖХ с обращенными фазами типа С18 (предпочтительно
со сферическими частицами и эффективностью не менее 5000 теоретических тарелок)’. Число
теоретических тарелок N может быть рассчитано исходя из формы пика, полученного при вводе одного
из стандартных растворов кофеина (см. 4.7), по формуле
N5,54
(
1
)
W
ол/
где t — время удерживания пика;
WQ5 — ширина пика на половине высоты.
•Spherisorto 5 ODS. Spherisorb 10 ODS. Nudeosil 5 C18. Nucleosil 7 C18. Nucleosfl 10 C18. Zorbax BP C18.
Hypersil ODS. CP-Sper C18. Bondapak C18. Supelcosil L C18 и Partisphere C18 являются примерами продукции,
имеющейся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не
является одобрением данной продукции со стороны ISO.
2