ГОСТ 31903—2012
Т а б л и ц а 1 — Определение «рабочей дозы» тест-культур
Тест-культуры
Время,
Учет имтснсизноет и клеточного дыхания
ч
Разв
е
де
н
ия
тест-*ульт
у
р
1 :2
1:4
1:8
1:161:32
1:641.128 1:256
1:512 1:1024
B.subt.. вар. 6633I
♦
+♦
+
■f+
♦
-
-
B.subt.. вар. L2
1
♦♦♦
♦♦
♦♦♦
♦
-
B.mycotdes 537
1
+♦
+•К
«■-
--
Micrococcus luteum АТСС 9341
1
++♦
++
-
-
-
-
П р и м е ч а н и е — (♦ )— полное обесцвечивание метиленового синего. (-) — отсутствие обесцвечивания.
Максимальное разведение тест-культур, вызывающее полное обесцвечивание метиленового
синего и выявленное через один час инкубации в термостате при температуре 37 X . принимают за
«рабочую дозу».
В среднем, «рабочуюдозу» тест-культур определяют:
для Bac.subtilis. вар. 6633в разведении 1:256
- Bac.subtilis. вар. L2
- Bac.mycoides537
- Micrococcus luteum АТСС 9341
-II-1:512
-II-1:128
-II-1:64.
6 Определение антибиотиков в анализируемой пробе
6.1 Проведение анализа
Подготовленные к исследованию испытуемые пробы по 5.1.1 вобъеме0,5 см3вносят в пробирки с
таким же (0.5 см3) количеством мясо-пептонного бульона и тщательно перемешивают. Во все пробирки
добавляют 0.5 см3взвеси, содержащейдвойную «рабочуюдозу» тест-культуры.
Последняя пробирка не содержит испытуемого субстрата и служит контролем ферментативной
активноститест-культуры.
Пробирки встряхивают и помещают в термостатна 3-часовую экспозицию тест-культуры с испыту
емым субстратом.
После этого в каждую пробирку вносят по 2 см3 растопленного и охлажденного до (45 и 1) X
мясо-пептонного агара с метиленовым синим и глюкозой. Содержимое пробирок смешивают и вновь
инкубируют в термостате при температуре (37 ♦ 1) X в течение 1—2 ч.
6.2 Обработка результатов
6.2.1 При отсутствии в испытуемых пробах антибиотика дыхательные ферменты бактериальных
клеток тест-культур не нарушаются и восстанавливают (т. е. обесцвечивают) в анаэробных условиях
метиленовый синий.
6.2.2 В контрольной пробирке, где нет испытуемой пробы, также происходит обесцвечивание в
течение 1—2 ч наблюдения втермостате при температуре (37 ± 1) X (контроль ферментативной актив
ности бактериальныхклетоктест-культуры).
6.2.3 При наличии антибиотика в испытуемой пробедыхательные ферменты бактериальных кле
ток блокируются, метиленовый синий невосстанавливается, цвет пробы остается синим.
7 Требования, обеспечивающие безопасность
При выполнении работ необходимо соблюдатьтребования ГОСТ ISO 7218.
Требования, обеспечивающие безопасность работы лаборатории:
- помещение лаборатории должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в
соответствии с ГОСТ 12.4.021;
4