ГОСТ 31903—2012
5.1.1.3 Яйца, меланж
Яйца, предназначенные для анализа, предварительно прогревают на водяной бане при темпера
туре (65 i 1) X в течение 10—15 мин до коагуляции белка, затем полностью смешивают содержимое
яйца, иотбираютпробы для анализа в количестве не менее 10см3.
5.1.1.4 Мясо исубпродукты
Мясо и субпродукты (печень, почки, язык и т. д.) скота и птицы, предназначенные для анализа,
измельчают при помощи мясорубки или гомогенизатора, помещают полученный фарш в чашку Петри и
даютстечьтканевому соку. Ткановой сок в объеме не менее 10см3 переносят в пробирку.
5.1.2 Термическая обработка проб пищевых продуктов
Перед проведением анализа пробирки с пробами, отобранными по 5.1.1, помещают в водяную
баню стемпературой (60 ± 1) °С. Параллельнос испытуемыми пробами вводяную баню помещают про
биркианалогичным продуктом итермометр. Времяпрогревания 30мин отмечаютсмоментадостижения
температуры внутри пробирки.
5.1.3 Тест-культуры для обнаружения антибиотиков
Тест-культурами служат вегетативные формы спорообразующих и неспорообразующих культур:
Bac.subtilis, вар. 6633: Bac.subtilis, вар. L2; Bac.mycoides 537; Micrococcus luteum АТСС 9341. обладаю
щих высокой чувствительностью кантибиотикам.
Для определения пенициллина и стрептомицина предпочтительно пользоваться следующими
тест-культурами— Bac.subtilis. вар. 6633; Bac.mycoides 537 и Micrococcus luteumАТСС 9341, для тетра
циклина— Bac.subtilis. вар. L2.
Музейные штаммы вегетативныхформ тест-культур хранят в столбике полужидкого 0.4 %-го пита
тельного агара.
5.1.3.1 Приготовление тест-культур
Вначале тест-культуру рассевают на чашки с 2 %-ным мясо-пептонным агаром для получения
отдельных колоний. Чашкиставятна (20 ♦.3)ч в термостат при температуре (37 ± 1)°С. После чего мел
кие колонии отсевают в пробирки с 2 %-ным мясо-пептонным скошенным агаром и вновь инкубируют в
термостате при температуре (37 ± 1)°С втечение (20 i 3)ч.
Микробную взвесь готовят путем смыва физиологическим раствором суточной культуры со ско
шенногоагара. Важно, чтобы смыв культур был абсолютно гомогенным и несодержал комочков.
Срокхранения полученной взвеси ахолодильнике при температуре (4 ± 1)°С — 7дней.
5.1.3.2 «Рабочаядоза» тест-культур
«Рабочаядоза» тест-культуры — наибольшееразведениесуспензии, вызывающееобесцвечива
ние метиленовогосинеговопределенноевремя втермостатепри температуре(37 ♦ 1)°С. При этом сле
дует учитывать, чтовремяобесцвечивания метиленовогосинего обратнопропорционально количеству
клеток в смыве. Для постановки реакции это время равно одному часу. Будучи величиной постоянной,
оно выявляет в суспензиях различной плотности одну итуже клеточную нагрузкудля каждойтест-куль
туры в отдельности. «Рабочую дозу» тест-культур устанавливают по дегидрогеназной активности
клеток.
5.1.3.3 Приготовление «рабочейдозы» тест-культуры
Полученную взвесь тест-культуры титруют путем последовательных двукратных разведений в
объеме 1см3питательного бульона. Пробирки с тест-культурой встряхивают и помещают на 3 ч в тер
мостат при температуре (37 ± 1) °С. Затем для создания условий, близких к анаэробным, в каждую про
бирку вносят по2 см3 растопленного и охлажденногодо температуры (45 • 1) °С 1%-ного питательного
агара с метиленовым синим и глюкозой (оба ингредиента асептично вносят в растопленный 1 %-ный
питательныйагариз расчета: на 100 см3среды 0.4см30.5 %-ноговодногораствора метиленовогосинего и
1см340 %-ногораствораглюкозы). Пробирки встряхиваютивновь инкубируютвтермостате при темпе
ратуре (37 ± 1)°С в течение 1—2ч. после чего учитывают результат(таблица 1).
Дыхательные ферменты бактериальных клеток тест-культур восстанавливают метиленовый
синий в анаэробных условиях, и содержимое пробирок, имеющее синий цвет, обесцвечивается. Разве
дение тест-культуры в последней пробирке с обесцвеченным метиленовым синим (♦) принимают за
«рабочую дозу». Функциональная активность дегидрогеназ тест-культур стабилизируется через сутки
после получения смыва, который хранится в холодильнике в точение одной недели. Поэтому «рабочую
дозу» первый раз определяютчерезсутки, а затем — через три дня.
з