ГОСТ 31745—2012
7.1.6Подготовка хроматографических колонок для очистки проб
7.1.6.1 Заполнение колонки силикагелем
Силикагель предварительно подвергаютдезактивации. Для этого к 50 г силикагеля, прокаленного
при температуре 180 X —200 X . добавляют 3 % (по массе) дистиллированной воды по капле и интен
сивно встряхивают после добавления каждой капли. Затем оставляют в эксикаторе на время не менее 18
чдлядезактивации. Последезактивации заполняют колонкусиликагелем массой (10.0
±
0.1) г. осто рожно
по стенке колонки заливают 25 см3 н-гексана. дают стечь н-гексану. не допуская высыхания верхнего
слоя. Заполнять колонку необходимо очень аккуратно, во избежание взмучивания и неравно мерного
заполнения колонки. Колонку готовят непосредственно перед очисткой и не используют повторно.
Каждую новую партию сорбента перед использованием необходимо проверить на качество
деления. Для этого через колонку с подготовленным сорбентом пропускают 1 см3 градуировочного
раствора №2 или N93 сдобавлением очищенного экстракта рабочей пробы по 7.2. проводят процедуру
очистки по 7.2.2, после чего анализируют с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Все индивидуальные ПАУ(особенно наиболеелегкие и наиболее тяжелые), входящие в состав градуи
ровочного раствора, недолжны быть потеряны или перекрываться пиками мешающих их определению
веществ. При неудовлетворительныхрезультатахлибо меняютпартиюсорбента, либоподбираютусло
вия очистки, варьируя объем отбрасываемой фракции иэлюата.
7.1.6.2 Заполнениехроматографической колонкисефадексом LH-20
(4.0 ♦0,1) г сефадекса марки LH-20 взвешивают нааналитических весах и заливают 50 см3этило
вого спирта, выдерживают для набухания не менее 3 ч. после чего осторожно переносят в колонку.
Колонку необходимо заполнять одномоментно, во избежание неравномерного заполнения колонки.
Дают стечьспиртудо высоты 1—2 мм надверхним слоем сорбента, послечего вносятэкстракт.
Заполненную колонкудопускается хранить и использоватьповторно. Для повторного использова
ния необходимо промытьколонку50см3этиловогоспирта. Дляхранениянеобходимозаполнитьколонку
этиловым спиртом, закупорить колонку пробкой и не допускать высыхания сорбента. В случае
высыха ния сефадекса рекомендуется приготовитьновую колонку.
7.1.6.3 Приготовление раствора гидроокисикалия в этиловом спирте
В колбувместимостью 150—200см3помещают (8.0
±
0.1)г гидроксидакалия, добавляют2см3дис
тиллированной воды и98 см3этилового спирта, перемешиваютдо полного растворения.
7.2 Проведение испытаний
7.2.1 Выделение ПАУ из продукта
Навеску продукта массой 10,0—20.0 г. взвешенную с точностью до 0.01 г, помещают в плоскодон
ную колбу вместимостью 250 см3,добавляют 50 см3спиртового раствора гидроокиси калия. Содержи
моеколбы перемешиваютвстряхиванием. Затем впробупродуктаипробуконтрольногоопыта вносят по
10 мкл внутреннего стандарта — рабочего раствора бенз(Ь)хризена. приготовленного по 7.1.2. массо
вой концентрацией5 мкг/см3.Колбусоединяютс обратнымхолодильником и нагреваютна водяной бане
при температуре 85 X —90 X в течение 3 ч. Затем в колбу через холодильник добавляют 100 см3дис
тиллированной воды. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и после охлаждения
переносятв делительную воронкувместимостью 250см3. В случаеесли послегидролиза в реакционной
массе остался нерастворимый осадок, его отделяютна воронке Бюхнера, промывая на фильтре 30 см3
горячего этилового спирта. Спирт после промывки добавляют в делительную воронку с реакционной
смесью. В делительную воронку такжедобавляют30 см3 н-гексана. Содержимое воронки встряхиваютв
течение 2 мин и оставляют для расслаивания. В случае образования эмульсии к смеси в делительной
воронке добавляют 10—20 см3 этилового спирта. После расслаивания нижнюю водно-спиртовую фазу
сливаютв колбу,а верхний гексановыйслой переливают вдругуюделительную воронку. Затем повторя
ютэкстракциюПАУизводно-спиртовойфракции н-гексаномеще два раза по30см3.Гексановыеэкстрак
ты объединяют вделительной воронке и промываютдистиллированной водой трижды по 30 см3, после
чего экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия в грушевидную колбу вместимостью
100 см3. Раствор выпаривают на ротационном испарителедо объема 50 см3при температуре водяной
бани не выше 50 X .
Упаренный экстракт переносят вделительную воронку вместимостью 250 см3идобавляют к нему
50 см3смесидиметилформамида с водой в соотношении 9:1. Интенсивно встряхиваютсмесь в течение
1мин. послерасслаиванияфаз нижнююсливаютв плоскодонную колбу, а верхний гексановыйслой сно
ва подвергают экстракции, добавляя 50 см3смесидиметилформамида иводы. Гексановый слой отбра
сывают. объединенный диметилформамидный экстракт переносят в делительную воронку
вместимостью 500см3,добавляют 100 см3дистиллированнойводы, встряхиваютипроводятэкстракцию
5