ГОСТ Р 53886—2010
Культивирование водорослей проводят следующим способом:
В колбу с питательной средой добавляют 15 см3суспензии водорослей из маточной культуры и выращивают
водоросли в течение десяти суток. Через 10 сут, когда плотность клеток обычно достигает максимума (107 кле-
ток/см3— для
Isochrysis
galbana и 5 106
клеток/см3
— для
Rhodomonas reticulata), культуры водорослей сгуща
ют
(концентрируют) с помощью центрифуги и размешивают до состояния суспензии, разбавляя морской водой.
Таким способом получают суспензию водорослей, предназначенную для корма тест-организмов, плотность кото
рой достигает примерное •107 клеток/см3для
Isochrysis galbana и
3 107 клеток/см3для
Rhodomonas reticulata.
Сус
пензии водорослей хранят в холодильнике
при температуре от О ’С до 4 ‘С в
течение 7 сут.
В емкости для культивирования тест-организмов вносят корм: по 0.25 см3 суспензии каждого вида водорос
лей на 1 дм3морской воды.чтообеспечиеаетплотностьклеток2 107клеток/дм3(1.25 107 клеток/дм3для
Isochrysis
galbana и0.75 107 клеток/дм3для
Rhodomonas reticulata)
Тест-организмы кормят каждый день в одинаковом объе
ме при условии, что пища, заданная 8 предыдущий день, съедена полностью.
Существует альтернативный режим, когда корм изсмешанных водорослей применяют только на науплиаль-
ных стадиях, на более поздних стадиях тест-организмы кормят только водорослями
Rhodomonas reticulata.
В.4 Условия культивирования
Tlsbe
ЬаНадДа/Volkmann-Rocco
В.4.1 Оборудование и процедура культивирования
Tisbe battagliai
Volkmann-Rocco культивируют в емкостях, содержащих от 2 до 5 дм3морской воды (см. 5.2),
без аэрации. Используют, как минимум, четыре емкости, чтобы можно было разделить тест-организмы по возрасту
и обеспечить постоянное возобновление тест-организмов для тестирования.
Морскую воду, в которой выращивают тест-организмы, обновляют одинраз в неделю: использованную мор
скую воду с тест-организмами пропускают через несколько нейлоновых сит с ячейками различного размера в
зависимости от того, какого возраста тест-организмы должны быть отделены, в порядке, приведенном в таб
лице В.5.
Т а б л и ц а B.S
Размер ячейки сита, мкм
Характеристика стадии удерживаемого организма
60
100
140
180
250
Удерживает все стадии
Удерживает все стадии, кроме науплиев в возрасте 0—2 сут
Удерживает копеподитов старше 5 сут и взрослых особей
Удерживает поздних копеподитов и взрослых
особей
Удерживает большую часть взрослых
особей
Тест-организмы, которые необходимо сохранить для возобновления данной культуры, переносят из сита в
свежую морскую воду (см В.1.2). Следуетотметить, что копеподиты и взрослые особи прилипают к стенкам емкос ти.
но их можно смыть на сито с помощью струи морской воды из пипетки или бутыли.
Для обычных целей новые культуры возобновляют путем отделения молоди от взрослых особей во время
еженедельной замены морской воды с использованием сит сячейками размером 180 и 60 мкм Последующие отде
ления особей по стадиям жизненного цикла с более короткими интервалами используютдля отделения тест-орга
низмов с меньшей разницей в возрасте, если, например, эти тест-организмы выращивают для дальнейшего
использования при тестировании.
В.4.2 Регулирование плотности популяции
Как правило, нет необходимости регулировать плотность популяции, которая была начата особями в возрас
те менее семи суток,до конца первой недели, когдаплотность популяции обычно непревышает 100особей на 1 дм3.
Рекомендуется избавляться от взрослых особей в возрасте 4—5 недель.
В.4.3 Кормление
Tisbe battagliai
Volkmann-Rocco питаются морскими водорослями. Успешно зарекомендовала себя одна из
водорослей.
Isochrysis galbana.
хотя смесь этой водоросли с
Rhodomonas reticulata
лучше усваивается тест-орга
низмами. Культивирование водорослей и подготовка культур — в соответствии с требованиями В.3.3.
Если для корма используют только водоросли
Isochrysis galbana.
то на 1дм3свежей морской воды вносят
5см3суспензииводорослей (плотность 5 Ю 7клеток/см3) (см. В.1.2),чтобы обеспечитьплотность водорослей, рав
ную 2.5 10еклеток/дм3. Если используют оба вида водорослей, то на 1 дм3 воды вносят3 см3суспензии водоросли
Isochrysis galbana
и 2 см3
Rhodomonas reticulata
(плотность З Ю 7 клеток/см3) (что обеспечивает плотность 1.5
•108клеток/дм3 водоросли
Isochrysis galbana
и 0.6 •10® клеток/дм3 водоросли
Rhodomonas reticulate).
Обычно тест-организмы при культивировании кормят ежедневно.
При содержании взрослых тест-орга
низмов с более высокой плотностью популяции требуется соответственно и дополнительное питание в таком же
объеме (указанном выше) один или два раза в неделю, но при условии, что предыдущая порция пищи съедена.
Тест-организмы, состоящие из науплиев в возрастеодной недели и копелодитов раннихстадий, обычно не требуют
дополнительного питания.
23