ГОСТ Р 53886—2010
Приложение В
(обязательное)
Методы культивирования тест-организмов
В.1 Условия культивирования тест-организмов
В. 1.1 Исходный материал для культивирования тест-организмов получают в лабораториях, занимаю
щихся тестированием.
имеющихкультуру требуемой видовой принадлежности.
Чувствительность культур к
модельному токсиканту должна соответствовать установленному в настоящем стандарте диапазону ЛК50
за 48 ч
(метод
Б) или ЛКЫ за 72 и
(метод
А).
Тест-организмы культивируют и содержат в климатостате, а инкубаторе, на водяной бане или в помещении с
регулируемой температурой (20
± 2)
*С.
При этом обеспечивают естественное или
искусственное
освещение так. чтобы соблюдались следующие
периоды выдержки: 16 ч — воздействие света при освещенности 500—1000 лк. 8 ч — без воздействия света (а
темноте).
WifocraspmipesBoeckH
Tisbe battagliaiV
olkmann-Rocco необходимо защищатьот воздействия прямого света.
АсаШа tonsa
Dana можетчувствоватьсебялучше приосвещенности средыс культурой тест-организмовдо 2200лк.
Тест-организмы и морская вода, в которой происходит их культивирование, должны содержаться в емкостях
только изстекла или полимерного материала, изготовленного без использования пластификатора.
П р и м е ч а н и я
1
Морские копеподы
Acarba tonsa
Dana.
Tisbe battaglial
Volkmann-Rocco и
Nitocra spinipes
Boeck имеют широ
кое географическое распространение, обладают коротким жизненным циклом и требуют минимум пространства и
оборудования для культивирования и проведения тестирования. Организмы могут культивироваться постоянно
в лабораторных условиях.
2 Развитие копепод (веслоногих раков)проходит через шесть науплиальных стадий и пятьстадий колеподи-
тов. послечего наступаетвзрослая стадия. При температуре 20 ‘С развитие только что вылупившихся науплиевдо
взрослой стадии проходит за 10—14 сут. Науплии выпускаются непосредственно из яйцевого мешка женской
особью Г/sbe
battagliai
Volkmann-Rocco и
Nitocra spinipes
Boeck в течение 3—4 сут.
Acarba tonsa
Dana
выпускает яйца в течение 2—3сут.
3 Приведенная в данном приложении информация предназначена для использования только в качестве
общего руководства.
В.1.2 Вода для культивирования тест-организмов
по 4.2 и
5.2
(далее — морская вода) в зависимости от
методзтвстироеаиия.принеобходимостикорректируютмимерализацию<соленость)водывсоответствиисусло-
виями тестирования.
В 1.3 Емкости, применяемые для культивирования тест-организмов, должны быть оснащены свободными
или перфорированными крышками, чтобы уменьшить испарение, но обеспечить газообмен. Потеря морской воды
из-за испарения должна возмещаться путем добавления дистиллированной или деионизированной воды.
В.
1.4 Емкости тщательно моют при
каждой
замене морской воды.
В. 1.5 В качестве корма используют культуру морских одноклеточных водорослей (десятисуточную).
В.2 Условия подгот овки к т естированию Artemia salina
L.
В.2.1 Оборудование и процедура получения науплиев
Для тестирования используют науплиев Artemia salina
L. в
возрасте одних суток (синхронизированная
культура),
которые получают в лаборатории из яиц.
Яйца хранят в холодильнике.
Каждую новую партию яиц проверяют на выклев. Используют яйца при выклеве не ниже 80 %. что опреде
ляет в дальнейшем физиологическую чувствительность тест-организмов односуточных науплиев Anemia
salina
L.
Тест-организмы для тестирования получают следующим
способом:
- в
стакан вместимостью 500 см3 помещают 0.1 г сухих яиц Anemia salina
L.,
заливают водопроводной
питьевой водой и выдерживают 30 мин.
П р и м е ч а н и е — Водопроводную питьевую воду предварительно отстаивают и аэрируют в течение
одних суток.
- через 30 мин. не взбалтывая содержимого стакана, сливают слой воды над яйцами, которые осели на
дно стакана,
удаляя
таким образом всплывшие погибшие яйца и пустые оболочки.
Процедуру
повторяют не
менее трех раз (заполняют стакан водой и сливают воду);
20