ГОСТ Р 53886—2010
-
отмытые яйца от пустых оболочек заливают морской водой (см. В .1.2) необходимой минерализации
(солености), значением pH 8.0— 8.3 и содержанием кислорода не менее 7м гО /дм 3ипри слабой аэрации выдержи
вают до выклева.
Выклев науплиев из яиц происходит через:
- 48 ч при температуре 20 "С:
- 24 ч при температуре 25
*С.
В.2.2 Регулирование плотност и популяции
Какправило, нетнеобходимости регулировать плотностьпопуляции тест-организмов при подготовке наупли
ев ктестированию.
Первых выклюнувшихся науплиев тщательно отбирают из стакана пипеткой Пастера, концентрируя их
возле одной из стенок направленным источником света (новорожденные науплии имеют положительный
фототаксис).
В течение одного часа
в
стакане накапливаются новые науплии. их также переносят пипеткой
в отдель
ный сосудс морской водой и
используют для тестирования.
Предварительную адаптацию науплиев Anemia saline
L.
к воде нужной минерализации (солености) не про
водят. так какрачок эвригалинный и может переносить минерализацию (соленость)
в
широком диапазоне.
Вода для замачивания яиц Anemia saline
L.
должна быть той же минерализации (солености), что и анализи
руемая проба.
В.2.3 Кормление
Науплии Artemia saline
L. в
течение 3—4 сут после выклева изяиц не нуждаются в кормлении в связи с эндо
генным питанием, поэтомупри тестировании их не кормят.
В.З Условия культивирования
Acartla tonsa Dana
В.3.1 Оборудование и процедура культивирования
Базовые культуры
Acartla tonsa
Dana
культивируют
в емкости с объемом
морской
воды (см. 5.2). равным
10— 12 дм3.Аэрацию обеспечивают централизованно черезотверстие возле дна емкостидиаметром около 1.5 мм.
со скоростью приблизительно один пузырек воздуха в секунду. Это обеспечивает мягкую циркуляцию
морской
воды, помогая поддерживать водороспи. являющиеся пищей, во взвешенном состоянии; при этом
удобно исполь зовать сферические емкости или емкости с плоским дном. Использование нескольких емкостей
позволяет разде лять культуры по возрастам.
Морскую воду обновляют, по меньшей мере, один раз в неделю. Использованную
морскую
воду пропускают
через несколько нейлоновыхситс ячейками различного размера, в зависимости оттого, организмы какого возраста
необходимо сохранить или отделить, в порядке, приведенном в таблице В.1.
Т а б л и ц а В.1
Размер ячейки
сита,
мкм
Характеристика стадии удерживаемого
организма
60
Удерживает все стадии
100
Удерживает все стадии, кроме яиц и науплиев в возрасте 2 сут
140
Удерживает копеподитов и взрослых особей
180
Удерживает только взрослых особей
Тест-организмы, которые необходимо сохранить для возобновления данной культуры, переносят из сита в
свежую
морскую
воду (см. В.1.2). Невылупившиеся яйца собираются на дне емкости и их удаляют путем откачива
ния морской воды со дна емкости. Однако ихтрудно отделитьот молодыхнауплиев. которые могут там находиться, так
как надне емкости собирается также осадок, включая остатки пищи, который
систематически удаляют.
Обычно новые культуры возобновляют, используя молодь или взрослых особей, отделяя их во время ежене
дельной замены
морской
воды, сприменением ситразмером ячеек 180и 60 мкм. Допускается проводитьотделение
молоди с меньшими интервалами времени, что позволяет получить более близкие возрастные группы, в том слу чае.
если, например, особей выращивают для использования при тестировании. Другим способом отделения
взрослых особей от молоди является перенос взрослых особей е специальную клетку, которая позволяет яйцам
падать сквозь ячейки сита в контейнер с водой.
В.3.2 Регулирование плотности популяции
Как правило, нет необходимости регулировать плотность популяции, которая была начата особями в возрас
те менее семи суток, до конца первой недели, когда плотность популяции обычно не превышает 25—50 особей на
1дм3.Когда копеподы достигают взрослой стадии, плотность, при необходимости, должна быть снижена до 25 осо бей
на 1дм3.Рекомендуется избавляться от взрослых особей в возрасте 5—6 недель.
21