ГОСТ 31477—2012
Соевый изолят с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 85 %.
Кислота борная по ГОСТ 9656. ч.
2-амино-2(гидроксиметил)-1.3-проландиол (ТРИС) с массовой долей основного вещества 99.9 %.
Соль динатриевая этилендиамин-N, N. N’, N’-тетрауксусной кислоты (трилон Б) по ГОСТ 10652,
ч.д. а.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, обо
рудования с техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем
стандарте.
7 Подготовка к выполнению измерений
7.1 Приготовление растворов
7.1.1 Приготовление концентрированного буферного раствора
Навеску 2-амино-2(гидроксиметил)-1,3-пропандиола (ТРИС) массой 15,0 г и навеску трилона Б
массой 1.5г с помощью воронки переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3и при перемешивании
добавляют 100—150 см3дистиллированной воды. Полученный раствор перемешивают, в него добавля
ют постепенно 5,5 г борной кислоты и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Рас
твор тщательно перемешивают до растворения осадка.
7.1.2 Приготовление рабочого буферного раствора
В мерную колбу вместимостью 250 см3с помощью мерного цилиндра вносят 50 см3 концентриро
ванного буферного раствора. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой, тщательно
перемешивают и получают рабочий буферный раствор, содержащий в 1см30,012 г ТРИС. 0.001 гтрило на
Б и 0,0044 г борной кислоты.
7.2 Приготовление испытуемого экстракта пробы
7.2.1 Навеску пробы массой 5.0 гперемешивают с 5 см3 рабочего буферного раствора в гомогени
заторе в течение 5 мин и выдерживаютсмесь 1ч при температуреот 5 ССдо 8 X . периодически встряхи
вая в течение 5 мин.
7.2.2 Смесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Для измерений используют вер
хний прозрачный слой, содержащий экстракт анализируемого белка.
7.3 Приготовление двухкомпонентных модельных мясорастительных смесей
для построения градуировочного графика
Навески по 25,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 400,0 г и 100,0 г сое
вого иэолята и навески по 100,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 100. 30,15
и 3,5 г соевого изолята.
Каждую смесь перемешивают на микроизмельчителе тканей в течение 30 мин до образования го
могенной массы. Допускается использование уменьшенных навесок в случае приготовления смеси пу
тем растирания в ступке. Получают двухкомпонентные модельные мясорастительные смеси, массовая
доля животного (свиного, говяжьего, бараньего) белка в которых относительно массовой доли общего
белка равна 1,3 %, 5,0 %; 17,5 %; 41,4 %; 58.5 % и 86.1 %.
Предварительно определяют массовую долю общего белка методом Кьельдаля по ГОСТ 25011.
8 Проведение измерений
8.1 Измерение испытуемых растворов
8.1.1 20 мм3экстракта пробы смешивают с 400 мм3рабочего буферного раствора, измеряют фо
новое поглощение на спектрофотометре при). = 405 нм (контроль), затем добавляют 20 мм3 диагности
ческой сыворотки, содержащей антитела, к определяемому виду белка, проводят реакцию осаждения
при постоянном встряхивании смеси в течение 1 ч. Для выявления специфического белка измеряют
оптическую плотность среды в кювете с толщиной оптического слоя 1 см.
8.1.2 Для подтверждения действия диагностической преципитирующей сыворотки на животный
белок параллельно проводят анализ контрольного образца, не содержащего определяемый белок.
8.1.3 Для каждого испытуемого раствора проводят два измерения, по результатам которых с по
мощью градуировочного графика находят средние значения массовой концентрацииживотного (говяжь
его. свиного, бараньего) белка в этих растворах.
з