ГОСТ Р 53514—2009
Диагностическая сыворотка по (4].
Свинина, говядина, баранина с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 18 % поГОСТ 25011
для использования в качестве контрольного образца.
Соевый изолят с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 85 % по ГОСТ 25011.
Кислота борная по ГОСТ 9656. ч.
2-амино-2(гидроксиметил>-1,3-пропандиол (ТРИС) с массовойдолейосновного вещества 99,9%.
Соль динатриевая этилендиамин-N. N, N’, N’-тетрауксусной кислоты (трилон Б) по ГОСТ 10652,
ч.Д.а.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, обо
рудования с техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем
стандарте.
7 Подготовка к выполнению измерений
7.1 Приготовление растворов
7.1.1 Приготовление концентрированного буферного раствора
Навеску 2-амиио-2(гидроксимотил)-1.3-пропандиола (ТРИС) массой 15,0 г и навеску трилона Б
массой 1,5 гс помощью воронки переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3 ипри перемешивании
добавляют 100 — 150 см3дистиллированной воды. Полученный раствор перемешивают, в него добав
ляют постепенно 5,5 г борной кислоты и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.
Раствор тщательно перемешивают до растворения осадка.
7.1.2 Приготовление рабочего буферного раствора
В мерную колбу вместимостью 250 см3с помощью мерного цилиндра вносят 50 см3 концентриро
ванного буферного раствора. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой, тщательно
перемешивают иполучают рабочий буферный раствор, содержащий в 1см30,012 г ТРИС. 0,001 г трило-иа
Б и 0.0044 г борной кислоты.
7.2 Приготовление испытуемого экстракта пробы
7.2.1 Навеску пробы массой 5,0 г перемешивают с 5 см3рабочего буферного раствора в гомогени
заторе в течение 5 мин и выдерживаютсмесь 1ч при температуре от 5 вС до 8 °С, периодически встря
хивая в течение 5 мин.
7.2.2 Смесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Для измерений используют вер
хний прозрачный слой, содержащий экстракт анализируемого белка.
7.3 Приготовление двухкомпонентных модельных мясорастительных смесей для постро
ения градуировочного графика
Навески по 25.0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 400,0 г и 100,0 г сое
вого изолята и навески по 100,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 100,30,15
и 3.5 г соевого изолята.
Каждую смесь перемешивают на микроизмельчителе тканей в течение 30 миндо образования го
могенной массы. Допускается использование уменьшенных навесок в случае приготовления смеси пу
тем растирания в ступке. Получают двухкомпонентные модельные мясорастительные смеси, массовая
доля животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в которых относительно массовой доли общего
белка равна 1,3 %: 5,0 %; 17,5 %; 41.4 %; 58,5 % и 86,1 %.
Предварительно определяют массовую долю общего белка методом Кьельдаля по ГОСТ 25011.
8 Проведение измерений
8.1 Измерение испытуемых растворов
8.1.1 20 мм3 экстракта пробы смешивают с 400 мм3рабочего буферного раствора, измеряют фо
новое поглощениена спектрофотометре при /. = 405 нм (контроль), затем добавляют 20 мм3диагности
ческой сыворотки, содержащей антитела, к определяемому виду белка, проводят реакцию осаждения
при постоянном встряхивании смеси в течение 1 ч. Для выявления специфического белка измеряют
оптическую плотность среды в кювете с толщиной оптического слоя 1см.
з