ГОСТ Р 53149—2008
Жидкостной хроматограф Shimadzu LC-2010A с флуоресцентным детектором RF-10A.
Колонка длиной 250 мм и диаметром 4.6 мм с обращенной фазой С18. размер частиц 5 мкм.
Подвижная фаза: ацетонитрил, метанол. 0.02М раствор уксусной кислоты.
Градиент: ацетонитрил — от 30 % до 50 % в течение 30 мин.
Метанол от 30 % до 50 % в течение 30 мин.
0.02М раствор уксусной кислоты — с 40 % до 0 % в течение 30 мин.
Длина волны возбуждающего света 337 нм. эмиссии — 520 нм.
Скорость элюирования: 1 мл/мин.
Объем вводимой пробы: 20 мкл.
7.2.6 2 Градуировка хроматографа
Градуировку хроматографа проводят, используя дериватные градуировочные растворы, приго
товленные по 7.2.5 сдобавлением внутреннего стандарта. В качестве внутреннего стандарта использу
ют 1.7-диаминогелтан.
В условиях, позволяющих разделить все составные вещества калибровочной смеси (см. 7.2.6.1),
записывают не менее трех хроматограмм для каждого раствора.
Определяют среднеарифметическое значение площади пиков каждого амина, рассчитанное из
трех хроматограмм.
Отдельно записывают подве хроматограммы для каждого амина для определения времени удер
живания, используя дериватные исходные растворы, приготовленные по 7.2.4. объем инжекции 1—
2 мкл.
На основании полученных данных проверяют стабильность значений времени удерживания ами
нов и рассчитывают градуировочные коэффициенты.
Сходимость значений времени удерживания считают удовлетворительной при отклонении значе
ний времени удерживания не более чем на 5 %.
Градуировочный коэффициент К. определяемый экспериментально в зависимости от выбранных
условий детектирования по хроматограмме стандартной смеси биогенных аминов, включающей 1.7-ди
аминогелтан, для каждого амина вычисляют по формуле
8 Обработка результатов испытаний
На основании полученных данных определяют массовую концентрацию Хпкаждого амина, мг/кг, в
продукте по формуле
где mcr— масса внутреннего стандарта, введенного в пробу продукта и пробу контрольного образца,
мкг;
К — градуировочный коэффициент, установленный по формуле (1);
S, — площадь пика амина на хроматограмме пробы продукта, уел. ед.:
S2— площадь пика амина на хроматограмме пробы контрольного образца, уел. ед.;
Sj — площадь пика внутреннего стандарта на хроматограмме пробы продукта, уел. ед.;
(
1
)
где тп— масса введенного амина, мкг.
S2— площадь пика внутреннего стандарта, уел. ед.;
т2 — масса внутреннего стандарта, мкг:
S„ — площадь пика индивидуального полициклического ароматического углеводорода (ПАУ),
уел. ед.
Градуировочный коэффициент К рассчитывают для каждого компонента каждого раствора. Его
значения не должны отличаться от среднеарифметического более чем на 10 %.
7.2.6.3 Проведение измерений
Анализируемые растворы хроматографируют дважды в одинаковых условиях.
Определение содержания биогенных аминов проводят методом внутреннего стандарта.
- S 2/S4 )
м
(
2
)
5