ГОСТ Р 52337—2005
5.1.2.5 Приготовление корма для стилоиихий
Свежие хлебопекарные дрожжи предварительно тестируют на общую токсичность. Затем навеску
массой 50 г измельчают и высушивают в сушильном шкафу при температуре 50 °С—55 °С в течение
двух суток.
Хранят готовые дрожжи встерильной банке с притертой крышкой всухом прохладном месте не бо
лее 12 мес. избегая попадания прямых солнечных лучей и насыщения дрожжей атмосферной влагой.
5.1.2.6 Культивирование стилоиихий
Культивирование стилоиихий и тестирование кормов проводят вотдельном помещении, изолиро
ванном от химических токсичных реактивов (особенно от летучих соединений, хорошо растворимых в
воде). В стерильную чашку Петри вносят 25 см3рабочего раствора Лоэина-Лозинского, затем пипеткой
переносятв нее массу стилоиихий. При этом кончик пипетки, заполненный культуройстилонихии, нужно
предварительно погрузить в чашку Петри с рабочим раствором Лозина-Лозинского. Туда же в качестве
корма для стилоиихий на кончике иглы, продезинфицированной 70 %-ным раствором этилового спирта,
вносят 0,003 г высушенных дрожжей (2-3 крошки диаметром 1—2 мм). Чашку Петри помещают в
термостат для культивирования стилоиихий при температуре 22 °С—24 °С. Пересев культуры для
хранения проводят 2 раза в неделю.
Допускается культивирование стилоиихий вне термостата при температуре 18 °С—24 °С. В этом
случае для поддержания постоянной температуры используют лампу дневного света, установленную
на определенном расстоянии от чашек Петри, обеспечивающем заданную температуру. Лампу вместе с
чашками накрывают полиэтиленовой пленкой, создав подобие теплички, где температура должна быть
постоянной. Во избежание попадания прямых солнечных лучей чашки Петри накрывают бумагой.
Необходимо учитывать, что культура стилоиихий не обладает генетической стабильностью.
Приблизительно через год—полтора работы с культурой она стареет, теряет однородность, жизне
способность. подвижность, неадекватно реагирует на токсиканты. В этом случае необходимо раз
в год подсаживать свежий клон стилоиихий кстарой культуре или полностью заменять ее на новую.
С целью замедления процесса вырождения культуры стилоиихий при пересадке на свежую среду не
обходимо отбирать не только из предыдущей чашки Петри суточную культуру, но и из двух резер
вных чашек Петри с 2-, 3-суточными культурами, в которых инфузории имеют наибольшую
подвижность и плотность.
5.1.2.7 Подготовка тест-организмов
Для биотестирования используют только суточную культуру стилоиихий. находящуюся вфазе экс
поненциального (активного) роста. С этой целью за сутки до анализа массу стилоиихий пересаживают в
новую питательную среду с кормом и помещают в термостат при оптимальной температуре 22
°С—24 °С. При этом стилонихии активно размножаются и концентрируются вокруг корма.
Недопускается использовать культуру стилонихии, зараженную другими видами простейших, мик
роскопическими грибами или бактериями, что может произойти при использовании нестерильной посу
ды, плохо подсушенных или просроченных дрожжей.
Для получения достоверных результатов биотестирования необходимо регулярно проверять со
стояние стилоиихий. их подвижность, а раз вмесяц — реакцию культуры на действие модельного токси
канта (5.1.2.4), для чего каплю со стилонихиями помещают влунку предметного стекла и после подсчета их
количества заливают 0.2 см3раствора модельного токсиканта рабочей концентрации 0.1 мг/дм3. Че рез
30 мин подсчитывают количество оставшихся живыми стилоиихий. Результат считают
удовлетворительным, если выживают не менее 50 % стилоиихий.
5.1.2.8 Подготовка исследуемого корма
Среднюю пробу исследуемого корма измельчают и просеивают через сито с отверстиями диамет
ром 1 мм.
5.1.2.9 Приготовление водного раствора ацетонового экстракта
Навеску исследуемого корма массой (10 ± 0.1) г помещают впробирку с пришлифованной пробкой
вместимостью 25 см3 или в коническую колбу со шлифом вместимостью 50 или 100 см3 и заливают
определенным количеством ацетона в зависимости от вида исследуемого корма.
Для получения ацетонового экстракта пробирку или колбу энергично встряхивают не менее 2 мин,
а затем отстаивают в течение не менее 10 мин и не более 15 мин.
При высокой набухаемости (гигроскопичности) исследуемого корма допускается увеличивать ко
личество ацетона на 5—10 см3таким образом, чтобы толщина слоя ацетона над кормом была не менее
2 мм. Раствор вновь взбалтывают втечение 2 мин. После повторного отстаивания втечение 10 мин осто-
735