ГОСТ Р 52337—2005
5.2 Биотестирование кормов на колподах (Colpoda stcinii)
Метод основан на извлечении из исследуемых кормов фракций токсичных веществ параллельно
ацетоном и водой с последующим воздействием этих веществ на колподы. Время полного анализа од
ной пробы — 3.5 — 4 ч. десяти проб — 4,5 — 5 ч.
Данный метод предполагает использование сухой культуры колподы в лабораториях, не имеющих
возможности постоянно поддерживать в активном физиологическом состоянии стилонихии.
5.2.1 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы — по 5.1.1.
5.2.2 Подготовка к проведению испытаний
5.2.2.1Изготовление блока луночных микроаквариумов и порядок обработки посуды — по 5.1.2.1
и 5.1.2.2.
5.2.2 2 Приготовление модельного токсиканта — по 5.1.2.4.
5.2.2.3 Приготовление рабочего раствора питательной среды для разбавления ацетонового экс
тракта исследуемого корма
Средой для разбавления ацетонового экстракта является раствор Лозина-Лозинского (5.1.2.3).
5.2.2.4 Подготовка тест-организмов
Сухая культура колподы для эколого-токсикологических исследований [6] по внешнему виду пред
ставляет собой округлые цисты покоя, прикрепленные к кусочку целлофановой пленки и стенке флако
на, видимые при увеличении в 80 — 150 раз.
Культуру колподы выпускают вофлаконах или ампулах. Каждый флакон (ампула) рассчитан на по
лучение 2 см3активной культурыс концентрацией не менее 5000 клеток в1 см3. Вкачестве источника пи
тания для колпод используют споры бактерий Bacillus subtilis, прикрепленные к кусочку целлофана
вместе со спорами колпод. К каждым двум упаковкам культуры прилагается флакон (ампула)с питатель
ной средой.
Срок годности культуры — один год от даты выпуска препарата. Препарат хранят при комнатной
температуре взащищенном от света месте.Для проведения исследований не позднее чем за 24 ч до ис
пользования вскрывают два флакона с культурой колподы иодин флакон с питательной средой (один на
бор). В каждый флакон с культурой колподы наливают по 2 см3 питательной среды, затыкают
ватно-марлевыми пробками и ставят в термостат при температуре 26 аС — 28 °С на 24 ч. За это время
происходит массовое амнистирование спор. При этом полученная культура колподы находится вфизи
ологически активном состоянии, оптимальном для постановки биотеста в течение трех суток после экс-
цистирования.
Непосредственно перед применением необходимо убедиться вактивности культуры колподы. Для
этого каплю культуры исследуют под микроскопом (увеличение 2x14). Колподы в количестве не менее 50
клеток в поле зрения должны активно двигаться. Кроме этого необходимо проверять активность куль туры
(новой партии) на модельном токсиканте (4.1.2.4). Для этого смешать на предметном стекле каплю
культуры с такой же по объему каплей рабочего раствора сульфата меди (0.1 мг/дм3). В течение 30 мин
должны оставаться живыми и подвижными не менее 50 % колпод.
5.2.2.5 Подготовка исследуемого корма
Среднюю пробу исследуемого корма измельчают до прохода через сито с ячейками диаметром
1 мм. Полученный таким образом однородный образец корма готовят параллельно двумя способа
ми: 1) экстракцией токсичных соединений из образца ацетоном с последующим разведением
ацетоно вого экстракта водным минеральным раствором Лозина-Лозинского; 2) экстракцией
токсических соединений из образца водным минеральным раствором Лозина-Лозинского для
дополнительного об наружения водорастворимых токсинов.
Концентрированные компоненты комбикормов и кормовыедобавки анализируют по схеме биотес
тирования комбикормов, предварительно введя эти вещества в количестве, определенном рецептом
или зоотехническими нормами, в размолотый образец проверенного биотестированием нетоксичного на
100 % зерна пшеницы.
5.2.2.6 Приготовление водного раствора ацетонового экстракта испытуемого корма — по 5.1.2.9.
5.2.2.7 Приготовление водного экстракта испытуемого корма — по 5.1.2.10.
5.2.3Проведение испытания
Из флакона отбирают 20 мкл питательной среды с колподами и помещают в микроаквариум или в
лунку предметного стекла. Туда же приливают либо 200 мкл водного раствора ацетонового экстракта,
либо 200 мкл водного экстракта исследуемого корма.
В контрольных тестах (проводят втрех повторностях при смене партии свежеприготовленного рас
твора Лозина-Лозинского) к 20 мкл раствора с инфузориями приливают 200 мкл минерального раствора
Лозина-Лозинского. а для проверки качества ацетона — к 20 мкл раствора с инфузориями приливают
8
76