ГОСТ Р 52337—2005
Баня водяная с максимальной температурой нагрева 100 5С, обеспечивающая точность поддержа
ния температуры ± 0.5 вС.
Колбы с пришлифованными пробками исполнения 2 вместимостью 1000. 500 или 100 см3второго
класса точности по ГОСТ 1770.
Чашки для выпаривания Ne 5 вместимостью 250 см3по ГОСТ 9147.
Воронки лабораторные по ГОСТ 25336.
Цилиндры мерные исполнения 1 или 3 вместимостью 250 см3по ГОСТ 1770.
Лопатки стеклянные или пластиковые для нанесения раствора.
Сито металлическое с отверстиями диаметром 1 мм по [4].
Ножницы маникюрные с загнутыми кверху концами.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Кролик белый (живая масса 2—2,5 кг) с неповрежденной кожей.
Воротник из фанеры или пластика размером 15
х
20 см.
Ацетон по ГОСТ 2603. ч.д.а.. ос.ч.
Масло подсолнечное рафинированное по ГОСТ Р 52465.
6.1.2Подготовка к проведению испытаний
Среднюю пробу корма измельчают и просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
6.1.2.1 Приготовление ацетонового экстракта испытуемого корма
В колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 500 см3помещают 50 г измельченного корма,
заливают его 150 см3ацетона и оставляют для экстракции на 24 ч или экстрагируют 3 ч на аппарате для
встряхивания жидкостей. Слой экстрагента над пробой должен быть не менее 1 см.
После окончания экстракции жидкость фильтруют через бумажный фильтр и помещают в чашку
для выпаривания. Оставшийся вколбе корм дополнительно промывают небольшой порцией экстраген
та (не менее 20 см3), эту промывную жидкость фильтруют через тот же фильтр в ту же чашку.
Экстракт концентрируют в вытяжном шкафу до полного удаления запаха растворителя и получе
ния маслянистого остатка желтоватого или коричневого оттенка. Для ускорения процесса чашкудля вы
паривания с экстрактом помещают на водяную баню температурой 45 вС—50 ®С.
Периодически оседающий на стенках чашки осадок смывают на дно чашки, покачивая ее и обмы
вая стенки растворителем. Экстракт, оставшийся настенках чашки, смывают экстрагентом надно. затем
снова концентрируют. Вчашку, при необходимости, добавляют растительного масла в таком
количестве, чтобы общий объем пробы был не монее 1 см3. Экстракт хранят в холодильнике.
При одновременном тестировании ацетонового экстракта данного образца на кроликах и мышах
следует брать навеску в 150 г. помещать ее в коническую колбу на 1000 см3 и заливать 300 — 400 см3
ацетона.
6.1.2.2 Приготовление тест-организма
У кролика на участке кожи размером 6 х 6 см в области бедра, лопатки или бока вдень постановки
испытания тщательно выстригают волосяной покров (до полного оголения). Не допускается для испыта
ния кожа поврежденная, пигментированная, а также с признаками шелушения.
На одном кролике допускается ставить одновременно не более четырех проб. Повторное исполь
зование кролика для постановки биопробы допускается лишь при получении отрицательных результа
тов предыдущих испытаний и полного восстановления шерстного покрова.
Всо корма для вивариумных животных, используемых в биотестировании,должны быть непремен
но проверены на общую токсичность и иметь отрицательные результаты. В противном случае в крови
животных будет идти процесс накопления антигенов, который выражается в аллергической
реакции кожи. Постановка биотеста на таком животном даст искаженные результаты испытания.
6.1.3 Проведение испытания
На выстриженный участок кожи кролика стеклянной или пластиковой лопаткой наносят, слегка вти
рая. половину экстракта, вторую половину экстракта оставляют для повторного нанесения на следую
щий день в холодильнике. В качестве контроля используют один оголенный участок кожи размером
6 х 6 см. на который не наносят экстракт. С целью предупреждения слизывания экстракта,
нанесенного на кожу, на шею кролика надевают воротник, который снимают не ранее чем через 3 сут
после первого нанесения экстракта.
Наблюдение за реакцией начинают на следующий день после повторного нанесения экстракта и
продолжают в течение 3 сут.
Новую партию растительного масла, используемого для разбавления экстракта, необходимо пред
варительно проверить на токсичность. Для этого выстриженный участок кожи дважды (с интервалом в
сутки) смазывают растительным маслом и учитывают кожную реакцию. Масло не должно вызывать
покраснения кожи.
ю78