ГОСТ 13496.7—97
- глюкоза по ГОСТ 6038;
- соль морская;
- ацетон, ч. д. а. по ГОСТ 2603;
- стандарт-титр гидроокиси натрия молярной концентрации эквивалента 0,1 моль/дм3 или
натрия гидроокись по ГОСТ 4328;
- липоцеребрин по фармакопее;
- спирт этиловый технический по ГОСТ 17299 или спирт этиловый ректификованный техни
ческий по ГОСТ 18300;
- вода дистиллированная по ГОСТ 6709;
- инфузория тетрахимена пириформис —3—5-суточная тест-культура.
5.3Подготовка к испытанию
5.3.1 Приготовление пептоновой среды
К 100 см3дистиллированной воды прибавляют в граммах; пептона —2, глюкозы —0,5, дрож
жевого экстракта —0,1, морской соли —0,1. Доводят pH полученного раствора до 7—7,5 раствором
гидроокиси натрия молярной концентрации эквивалента 0,1 или 0,01 моль/дм3, pH проверяют на
pH-метре. Стерилизуют кипячением 30 мин.
5.3.2 Приготовление 5 %-ного раствора глюкозы
В колбу емкостью 100 см3 помещают 5 г глюкозы и доводят до метки дистиллированной
водой.
5.3.3 Хранение маточной культуры инфузории тетрахимена пириформис
В бактериологические пробирки приливают по 2 см3или в плоскодонные конические колбы
по 10 см3пептоновой среды и стерилизуют кипячением 30 мин.
Пересев культуры инфузории проводят через каждые 4—5 сут стерильной пипеткой. При
использовании конических колб берут 0,2 см3 инокулята, а при использовании пробирок пересев
проводят бактериологической петлей. Конические колбы или пробирки с культурой инфузории
хранят при температуре от 22 до 24 °С.
5.3.4 Консервирование культуры инфузории тетрахимена пириформис
В плоскодонные конические колбы слоем не более 1 см разливают 5 %-ный раствор глюкозы.
Стерилизуют кипячением 30 мин. Охлаждают до комнатной температуры и вносят от 0,5 до 1 см3
культуры тетрахимена пириформис, выращенной на пептоновой среде в течение 3 сут. Хранят
колбы в затемненном месте при комнатной температуре не более 2 мес.
Можно консервировать инфузории в пептоновой среде с применением от 5 до 10 мг фарма
копейного липоцеребрина, растворенного в 100 см3 пептоновой среды. Для этого липоцеребрин
добавляют в среду, кипятят 30 мин, охлаждают и делают посев инфузорий, инкубируют 4 сут при
комнатной температуре, а затем ставят в холодильник при температуре от 5 до 8 °С, где хранят
в пробирках не более 3 мес, в колбах —не более 6 мес без потери жизнеспособности инфузорий.
5.3.5 Подготовка пробы
Среднюю пробу корма при необходимости измельчают и просеиваю!’ через сито с отверстиями
диаметром 1 мм.
5.3.6 Экстрагирование токсических веществ из проб корма
Навеску исследуемого корма около 50 г (зерно измельчают, комбикорма, отруби и другие
рассыпные корма используют без измельчения) высыпают в плоскодонную колбу со шлифом,
приливают 100 см3ацетона и экстрагируют на аппарате для встряхивания жидкостей в течение 1 ч.
Затем раствор осторожно сливают через бумажный фильтр в колбу или чашку для выпаривания.
Повторное экстрагирование проводят 50 см3 экстрагента (ацетона) в течение 30 мин. Жидкость
сливают через бумажный фильтр, промывают его от 10 до 20 см3экстрагента. Экстракты объеди
няют и выпаривают на водяной бане при температуре от 50 до 60 °С в вытяжном шкафу до полного
испарения экстрагента.
После выпаривания вносят от 1 до 2 см3экстрагента, чтобы смыть маслянистый экстракт со
стенок чашки, и приливают 10 см3 пептоновой среды. Перемешивают и выпаривают содержимое
до полного удаления запаха растворителя, фильтруют во флаконы и доводят до pH 7—7,5, согласно
5,3.1.
Параллельно, с целью определения качества растворителя и среды, готовят контрольный
экстракт. Для этого проводят упаривание растворителя (без навески корма), внесение среды,
доведение pH вышеизложенным способом.
5.4 Проведение испытаний
Исследование каждой пробы проводят 3 раза.
В 3 флакона для антибиотиков вносят по 1 см3 экстракта, приготовленного по 5.3,6, прили-
4