С. 4 ГОСТ 16445-78
Т а б л и ц а 2
Д о м о с н о в н о ю р азв е д е н и и
(1 :1 0 0 » . с м 3
Д о за ф н зо о л о ги ч е с к о го
p a c t в о р а , с м 3
О б щ и й о б ъ е м , с м 3
П о л у ч а е м о е р а зв е д е н и е
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.8
1.3
1.8
2.3
2.8
3.3
3.8
1.0
1.5
2,0
2.5
3,0
3,5
4.0
1:500
1:750
1:1000
1:1250
1:1500
1:1750
1:2000
Примечание. Разведения гемолизина приготовлены с учетом массовой доли в нем 50%глицерина,
поэтому при расчете количества гемолизинадля постановки РСК следует исходить из его тигра, нс учитывая
глицерина, то есть при титре гемолизина 1:1000 его удвоенный тигр будет 1:500. для приготовления которого
следуег взять0,1 см5 гемолизина и 49.9см3 физиологического раствора; прититре 1:1500удвоенный титр 1:750
(0,1 см! гемолизина +74.9 см3физиологического раствора) и тл.
3.5.2.2. Приготовление 2.5 %-ной взвеси эритроцитов барана.
Кровь у барана берут с утра, до кормления, из яремной вены, набирают во флакон со
стеклянными или металлическими бусами или без них. Встряхивают 7—10 мин, затем фильтруют
через марлю, 3—5 раз отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования с частотой
вращения 2500 мин-1 по 10 мин до полного обесцвечивания промывной жидкости. Из осадка
эритроцитов готовят 2.5 %-ную взвесь на физиологическом растворе.
3.6. П р о в е д е н и е и с п ы т а н и я
По 0.5 см3каждого разведения гемолизина переносят в пробирки, имеющие соответствующие
надписи, начиная с наибольшего разведения (1:2000). Затем в эти пробирки добавляют по 0.5 см3
комплемента в разведении 1:20, имеющего титр по ГОСТ 16446. по 1,0 см3 физиологического
раствора и по 0.5 см32,5 %-ной взвеси эритроцитов барана.
Одновременно, в тот же штатив, с правой стороны (конца) ставят три пробирки для контроля.
В первую пробирку контроля вносят 0.5 см3гемолитической сыворотки в разведении 1:100, 1,5 см3
физиологического раствора и 0.5 см3 2,5 %-ной взвеси эритроцитов барана; во вторую
пробирку вносят 0,5 см3 комплемента в разведении 1:20, 1.5 см3 физиологического раствора
и 0,5 см3 2,5 %-ной взвеси эритроцитов барана; в третью пробирку —0,5 см3 2.5 %-ной взвеси
эритроцитов барана и 2 см3физиологического раствора (табл. 3).
Т а б л и ц а 3
Д о зы
К О Ш 10И С М 1С 1В .
с м 3, п р и р а зв е д е н и и
К о м п о н е н т ы
г е м о л и зи н а
К о ш р о л ь
(г е м о л и зи н 1:100>
Н о м е р а
к о н т р о л ь н ы х
пробирок
1:100 1:500 1:750 1:11X10 1:1250 1:1500 1:1750 1:2П001
2
3
0.50.50,5
0.50.50,5
1.0 1,0 1,0
0,50.50,50,5
0,50.50,50,5
1,0
1,0
1,0
1,0
0,5
—
—
0.5
—
1,51.52.0
I. Гемолизин0,5
2. Комплемент (1:20)0.5
3. Физиологический раствор1.0
4. Эртропиты барана (2.5 %-иая
взвесь)0.5
0.50,50.5
0,50.50,50.5
0.50.50,5
В первой контрольной пробирке определяют безвредность гемолитической сыворотки, во
второй - безвредность комплемента, в третьей —наличие резистентности эритроцитов барана.
Штатив встряхивают и переносят в водяную баню на И) мин при 37—38 *С. Штатив с
пробирками изатекают из бани и проводят учет результатов реакций в проходящем свете.
3.5.2.1, 3.5.2.2, 3.6. (Измененная редакция, Изм. № 1).
3.6.1. Обработка результатов
Гемолитическую сыворотку считают активной при титре не менее 1:1000 и безвредной при
отсутствии гемолиза эритроцитов в первой пробирке контроля.